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Miltenyi 微珠和 |
孵育 72 小时后，在 T 细胞中检测到 Miltenyi "微珠 " 假影
结果
孵育 72 小时后，T 细胞可保留 Miltenyi 纳米颗粒
您将要查看的内容：
- 共聚焦、等表面和 TEM 图像显示了 Miltenyi 纳米颗粒在人类 CD3+ T 细胞中的内化情况。
- 在人类 CD3+ T 细胞囊泡中积聚的 Miltenyi 纳米颗粒。
这意味着：
72 小时后（参见以下新 TEM）， Miltenyi 纳米颗粒未生物降解。相比之下， Dynabeads 从细胞中释放并去除。
注：所有视频图像都是真实的影像，未经修改。
在德国，此网页不允许查看。
Miltenyi 是 Miltenyi Biotech 的商标。Miltenyi Biotech 不属于赛默飞世尔科技，也不由赛默飞世尔科技赞助或支持。
人类 CD3+ T 细胞对 Miltenyi MicroBeads 的吸收和细胞内积累
Miltenyi 微珠 ：与酸性囊泡共定位，在人 CD3+ T 细胞中保留 24 小时
细胞和微珠标记
根据生产商的方案，通过梯度离心（LymphoPrep，Axis-Shield）从健康献血者中生成 PBMC ，并在洗涤前在室温下采用 Vybrant 多色细胞标记试剂盒 （组分 C ， 货号 V22889）标记 30 分钟。在标记过程中滚动试管，避免细胞沉淀。在某些实验中， 在孵育过程中加入 LysoTracker Green Dye（货号 L7526）。CD3 微珠（货号 130-050-101 ，德国 Miltenyi Biotec）使用高交叉吸附山羊抗小鼠 IgG（H+L）Alexa 555（货号 A21424）进行标记。由于直接向 PBMC 中添加抗小鼠 IgG Alexa 555 抗体并不会在荧光显微镜中产生信号，因此 CD3 微珠的染色具有特异性。
微珠的检测
根据生产商的流程（德国 Miltenyi Biotec）使用 LS 色谱柱，通过标记的 CD3 微珠分离人 CD3+ T 细胞。立即在 Andor Revolution 转盘显微镜的玻璃盖玻片上对分离的细胞进行分析。以不同的时间间隔捕获帧（例如：每隔一秒，持续 15 分钟或每隔 5 秒，最长 45 分钟）。在某些实验中，将标记的 PBMC（70% 表达 CD3 的细胞）直接接种到玻璃盖玻片上，然后加入标记的 CD3 微珠进行活细胞成像。
查看更多数据
- Ex vivo isolation protocols differentially affect the phenotype of human CD4+ T cells, (abstract) Bernard et al 2002
- Cell response to dextran-derivatised iron oxide nanoparticles post internalisation,(abstract) Berry et al 2004
- Nanotoxicity of iron oxide nanoparticle internalization in growing neurons, (abstract) Pisanic et al 2007
细胞分离的两个世界
孵育 24、48和72小时前后 Miltenyi 纳米颗粒的更多 TEM 图像
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分离后 24 小时：CD3 分离细胞的 Epon 切片在 37°C 下孵育，在高放大倍数下表现出含有 Miltenyi 纳米颗粒（黑色斑点）的大型多囊体。 | |
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分离后 48 小时：CD3 分离细胞的 Epon 切片在 37°C 下孵育。 Miltenyi 纳米颗粒的高放大倍数图像含有电子密集隔室。 | |
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分离后 72 小时：CD3 细胞的 Epon 切片在 37°C 下孵育。 Miltenyi 纳米颗粒在两个相邻 CD3 阳性细胞的不同细胞内隔室中。 | |
避免假影 - 使用 Dynabeads
Miltenyi 与 Dynabeads 对比表
Miltenyi 微珠 | Dynabeads FlowComp™ | |
| 约 50 nm | 规格 | 2.8µM |
| 无 | 均一性 | 球形， 1-3% 差异 |
| 否 | T 细胞是否释放？ | 是 |
| 是 | 是否需要色谱柱？ | 否 |
 是 | 是否内化于 T 细胞中？ | 否  |
 是 | 保留在 T 细胞中 72 小时后？ | 否  |
Miltenyi 不归 DYNAL 或任何赛默飞世尔科技子公司所有。
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