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使用热启动技术对您的 PCR 有何益处？
非特异性扩增是显著影响 PCR 性能的主要问题之一，它会导致一个或多个问题：靶标扩增子产量低、靶标扩增子的检测灵敏度降低、解读结果不可靠、下游应用效果差。
非特异性扩增的一个常见来源是 DNA 聚合酶对错配序列的延伸和引物二聚体的形成。避免非特异性扩增的一个方法是在冰上制备 PCR 反应混合物。 较低的温度有助于降低 DNA 聚合酶的活性；然而，在 PCR 开始之前，仍可能合成出非目标产物。另一种解决方法是使用热启动 DNA 聚合酶。热启动修饰抑制了 DNA 聚合酶在室温下的活性，防止了非特异性扩增的假条带。
热启动技术的优点是什么？
- 防止引物结合到同源性低的模板序列上进行延伸（错配）
- 在反应体系配置过程中防止引物相互结合之后的延伸（形成引物二聚体）
- 增加靶片段的灵敏性和产量
- 在高通量或自动化液体处理平台上进行 PCR 体系配置，因为反应在室温下稳定，不会影响特异性
热启动技术是如何工作的？
热启动 PCR 方法使用酶修饰剂，如化学基团、抗体、Affibody 分子（亲合体）或适体（aptamer）。最常用的两种方法是化学修饰和抗体修饰。虽然它们在室温下都能抑制聚合酶的活性，但它们之间有一些关键的区别。
| 热启动技术 | 特点 | 注意事项 |
|---|---|---|
| 化学修饰 聚合酶与化学基团共价连接，在室温下阻断酶的活性。 示例：AmpliTaq Gold DNA 聚合酶 |
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| 抗体 聚合酶在其活性部位被抗体结合，在室温下阻断酶的活性。 示例：DreamTaq 热启动 DNA 聚合酶，Platinum II Taq热启动DNA 聚合酶，Platinum SuperFi II DNA 聚合酶 |
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| 亲合体（Affibody） 分子 聚合酶在其活性部位被 Affibody 分子（α螺旋肽）结合，在室温下阻断酶的活性。 示例：Phire Hot Start II DNA 聚合酶，Phusion Hot Start II DNA 聚合酶 |
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| 适体（Aptamer） 聚合酶在其活性部位被适体（寡核苷酸）结合，在室温下阻断酶的活性。 |
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