HPLC 检测器的工作原理

可变波长检测器的工作原理

可变波长检测器使用旋转光栅将多色光分散到光谱中。然后选择单波长的光，让其通过出射狭缝。

在光通过出射狭缝后，分束器或半透镜将光束分成两部分：一部分光进入稳压二极管，以测量未吸收时的强度。另一部分通过流通池，样本可在此吸收部分的光。剩余的光强度由检测光电二极管进行测量并转换为定量信号。

在暴露样本前选择波长，就可以使用一个波长的光来测量吸收情况。这种检测方法具有较高的灵敏度（因为同时测量了实际参比品），并且减少了样本在检测过程中的总曝光量。

与DAD相比，VWD具有更高的灵敏度，这对光敏化合物至关重要。  

二极管阵列和多波长检测器的工作原理

二极管阵列和多波长检测器均在光通过流通池后使用光栅将光分散到光电二极管阵列上。因此，同时进行所有波长的吸收，从而得出分析物的完整吸收光谱。

分析复杂混合物或成分未知的样本时，例如在方法开发或峰纯度分析时，首选这种检测方法。

FLD工作原理

荧光检测器的工作原理是，以特定波长激发后测量荧光分子发射的光子。

在电子弛豫过程中，光子发射前存在振动弛豫。这种振动弛豫会导致发射的光子相对于激发光子出现红移，称作斯托克斯位移。

简言之，荧光分子会发射高于原始吸收波长的光，从而失去剩余能量。

RID工作原理

折射率是一个无因次数，用于描述光在介质中与真空相比之下的传播速度。Snell 定律将光的折射定义为光穿过不同折射率介质间的边界。

较常见的折射率检测器是偏转型。在这种类型的检测器中，流通池具有样本池流路和参比池流路，以便与流动相进行比较。

当分析物通过样本流通池时，流通池内光的折射率和方向以与分析物浓度成比例的方式发生变化。在针对特定的分析物/流动相组合校准系统时，会应用光强度方向的后续变化来确定浓度。

CAD工作原理

在CAD中，分析物以带正电荷的气溶胶进行检测，总电荷以电流进行测量，而不受光学特性的影响。电荷大小取决于粒径，因此，质量越大，产生的颗粒越大、电荷越多。较大粒径可导致信号响应更高。

所有电雾式检测器都利用蒸发技术，而将分析物转换为可检测信号均包含相同的连续步骤：

1. 通过从洗脱液流形成液滴进行雾化
2. 通过选择特定尺寸范围的液滴进行调节
3. 通过将液滴转换形成由不挥发分析物组成的残留不带电气溶胶颗粒来实现蒸发
4. 将正电荷从电离气体转移到蒸发的气溶胶颗粒中
5. 通过静电计定量分析带电气溶胶颗粒

CAD和ELSD均是非线性的，蒸发气溶胶检测器能够检测不挥发化合物和许多半挥发化合物。但是，这两种技术的颗粒检测方式有所不同。

CAD测量的是颗粒电荷，而ELSD测量的是颗粒散射光的能力，此差异可显著影响检测器性能。   

ELSD也不如CAD灵敏，线性动态范围更窄，并且会因光散射而产生复杂的校准曲线。

此外，ELSD中的分析物间响应可能因颗粒的光学特性（例如折射率、吸收和荧光）而发生变化，这可改变检测器的灵敏度。

质谱仪有三个主要组件：离子源、质量分析仪和检测器（有时称为静电计）。在MS中，分析物被转化成气相，荷电，过滤，然后根据质荷 (m/z) 比进行检测。

离子源首先从洗脱液流中生成气相离子并为质量分析仪提供聚焦离子束。接下来，质量分析仪根据各自的 m/z 在时间或空间上分离离子。最后，检测器将离子转换为基于时间的电信号并输出在扫描范围内选定的 m/z 的光谱。

质谱仪之间的主要区别在于质量分析仪。既有示例包括离子阱、四极杆、飞行时间和轨道阱，使用不同分析仪来提供分辨率、速度和灵敏度优势。

串联质谱(MS/MS)使用了多级质量分析来获得比单级MS更多的结构信息和/或更高的特异性。在第一级，根据 m/z 分离前体离子。接下来，分裂选定的离子，通常通过惰性气体加速。最后，分离并检测碎片离子。

浏览我们的 MS 学习中心，详细了解质量检测的优势。