免疫组织化学技术的实验方案
我们的染色试剂盒包含完整的使用方案。本页列出了使用选定 Histostain™ 试剂盒所涉及的步骤和每个步骤所需的时间。它还包含去除内源性过氧化物酶、消化组织和抗原回收的方案。
去除内源性过氧化物酶活性
- 步骤 1：（用于石蜡包埋的切片，不用于冰冻切片。）通过向 9 份甲醇中加入一份 30% 过氧化氢来制备过氧化物酶封闭溶液。将玻片浸入该溶液中 10 分钟。用 PBS 冲洗三次。
- 步骤 2：(可与冰冻或石蜡包埋切片配合使用。)
使用 Peroxo-block™ 治疗切片 45 秒。立即洗涤。
去除残留生物素，亲和素或链霉素亲和素活性
热引导的抗原决定簇修复
抗原决定簇修复程序用于逆转在福尔马林固定石蜡包埋组织中的部分表位发生的逆转免疫原性缺失。我们发现某些抗体需要抗原回收（例如雌激素受体和 Ki-67 抗体），而许多其他抗体的染色将通过抗原回收（如 S-100，细胞因子蛋白和突触素抗体）增强。使用抗原回收无需支付许可费用。
A. 材料
- 加热板
- 1 liter 玻璃烧杯
- 0.01 M 柠檬酸盐缓冲液，pH 值 6.0（货号 00-5000）
- EDTA 溶液（货号 00-5500，用于需要 EDTA 而非柠檬酸盐缓冲液的抗体）
- PBS
B. 实验方案
- 组织应在涂有硅烷或多聚赖氨酸的载玻片，或涂有 HistoGrip™的载玻片上封片。
- 去除玻片上的石蜡，并根据需要进行亲和素/生物素封闭和内源性酶淬灭（参见上文）。
- 用蒸馏水冲洗玻片 3 次，每次 2 分钟。
- 将载玻片放入载玻片架中，并将架子放入含 500 mL 0.01 M 柠檬酸盐缓冲液的 1 liter 玻璃烧杯 (PYREX) 中。
- 将烧杯置于加热板上。将溶液加热至沸腾，并保持沸腾 10 分钟。
- 加热后，从加热板上取下烧杯，在室温下冷却至少 10-20 分钟。
- 用 PBS 润洗载玻片，然后启动免疫染色方案。
组织预消化
所有预稀释和 50 倍浓缩的IHC抗体的组织消化建议见我们的《解剖病理学目录》。应使用 HistoGrip™、Para-Pen、FRO-Pen、硅烷或多聚赖氨酸在玻片上对组织进行封片。
- 脱蜡，再水化和淬灭内源性酶活性（如有必要）。
- 用蒸馏水冲洗玻片 3 次，每次 2 分钟。
- 用蛋白水解酶在 37oC 下孵育切片.应根据每种应用确定孵育时间（标准化的消化试剂孵育 10 分钟，请咨询 Digest-All™
- 用 PBS 冲洗玻片 3 次，每次 2 分钟，然后继续进行免疫染色操作步骤。