赛默飞世尔科技提供广泛的质粒 DNA 提取产品,旨在以您需要的纯度和规模分离质粒 DNA。我们拥有多种高性能且经济高效的质粒纯化技术供选择,这些技术旨在帮助您克服常见的质粒制备问题,如低回收率和残留杂质。了解如何使用我们的试剂盒和质粒分离实验方案视频手动纯化质粒 DNA。

什么是质粒纯化?

质粒纯化又称为质粒分离或质粒 DNA 分离,是指从细菌细胞中提取和纯化质粒 DNA,使科研人员获得高度浓缩和纯化的质粒形式,以便进一步分析和实验。质粒纯化的关键步骤通常包括细菌细胞裂解、去除细胞碎片、结合质粒 DNA、清洗、洗脱质粒 DNA 以及根据下游应用的可选附加步骤。


为什么质粒纯化如此重要?

质粒纯化至关重要,因为质粒DNA(pDNA)是基因工程中的基础工具,支持克隆、基因表达研究和治疗开发等应用。高质量的质粒DNA对于确保关键下游项目(如疫苗生产、细胞和基因治疗)的准确性和可靠性至关重要,有助于推动科学突破。


传统手动质粒纯化的关键步骤通常包括:

Traditional plasmid DNA purification
  • 收集细菌:离心20–30分钟
  • 重悬、裂解、中和:在实验台上操作15–20分钟
  • 澄清裂解液:使用离心机、注射器或真空装置5–10分钟;“去除内毒素”
  • 结合、清洗、洗脱、沉淀:使用滴液技术和/或离心45–60分钟
  • 重悬于溶液中:在实验台上操作10分钟

总预计时间:95–130分钟


理解质粒纯化

质粒纯化有两个主要考虑因素:制备规模和纯度等级。这两者直接影响到下游应用的成功与否。从小规模研究到大规模治疗生产,这些因素——以及适当的纯度/内毒素水平——有助于确保获得适量的质粒DNA,从而实现可靠且可重复的预期结果。


质粒DNA分离的制备规模

质粒有不同的大小,包括小型(1–10 kb)、中型(10–50 kb)和大型(>50 kb)。小型质粒非常适合基础克隆和基因表达研究,中型质粒用于更复杂的基因工程任务,而大型质粒则适用于创建基因组文库和大规模基因项目。了解适当的培养基和质粒大小对于在基因研究和生物技术中取得成功至关重要。

质粒生长培养基,如LB肉汤、Terrific Broth (TB)、SOC培养基和2xYT,对于培养含有质粒的细菌细胞至关重要。这些营养丰富的培养基可以提高质粒产量,优化细菌生长条件,并提高转化效率,使其成为各种分子生物学实验的多功能工具。


Plasmid purification how-to videos


质粒 DNA 分离的制备量

 小提中提大提超大量提取宏量提取
过夜培养菌液体积1–5 mL25–100 mL100–500 mL500 mL–2.5 L2.5–5 L
大约产量高达 40 µg高达 400 µg高达 1.5 mg高达 5 mg高达 15 mg


质粒 DNA 分离纯度等级和内毒素水平

当涉及到质粒分离时,科研人员可以根据他们的具体需求进行一系列选择。分子级质粒分离技术提供了速度和成本效益,使其非常适合克隆、核酸标记、PCR 和测序等稳健应用,其中高纯度水平并非必需。另一方面,转染级质粒纯化技术专为需要更高纯度和更高产量的应用而设计,例如标准细胞系的转染和体外转录。转染级质粒 DNA 也可用于分子级应用。对于最敏感的应用,如转染敏感细胞系或体内研究,推荐采用高级转染级质粒分离技术。该技术有助于确保极高纯度,也可用于所有分子和转染级应用。

纯度等级分子转染高级转染
内毒素水平>10 EU/µg0.1–1 EU/µg<0.1 EU/µg

了解更多: 质粒 DNA 纯度等级

对质粒 DNA 进行稳健的纯化,以满足下游应用所需的产量和纯度,是任何蛋白表达工作流程的关键步骤。了解如何获得转染级质粒并将其与 Gibco ExpiCHO 和 Expi293 瞬时哺乳动物表达系统一起使用。

KingFisher PlasmidPro全自动大规模质粒提取仪

自动化质粒纯化


自动化质粒纯化解决方案

自动化质粒纯化 是一种先进的技术,利用机器人技术简化流程。Thermo Fisher 提供自动化质粒纯化解决方案,可对转染级质粒 DNA 进行高通量,无离心纯化。这些解决方案通过精确控制纯化步骤和试剂体积,最大限度地减少了人为错误,并有助于确保重现性。对于小规模应用,专门的磁珠纯化试剂盒可用于在具有液体处理能力的 KingFisher 平台上高效分离质粒 DNA。同样,对于大规模自动化而言, KingFisher Plasmi-Pro 大型处理器在预填充纯化柱方面具有无需手动操作的体验。通过该过程获得的纯化质粒 DNA 可用于一系列下游应用,包括转染,载体制备,酶修饰,克隆, 测序, 体外 转录 / 翻译。

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    使用KingFisher PlasmidPro实现质粒纯化自动化

    了解如何使用KingFisher PlasmidPro 全自动大规模质粒提取仪实现您的质粒DNA分离自动化。这是KingFisher仪器系列中的最新成员。


    质粒DNA纯化试剂盒

    在质粒纯化过程中,裂解细菌会释放大量内毒素,这些内毒素可能对细胞生长、细胞存活率、转染效率、蛋白质表达甚至模拟人类败血症产生负面影响。赛默飞世尔科技提供涵盖必要pDNA纯度级别的纯化试剂盒,包括转染级、高级转染级和分子级试剂盒。

    End to end plasmid solution
     Click image to enlarge

    赛默飞世尔科技的端到端解决方案。本工作流程展示了蛋白质表达的端到端解决方案,以及质粒纯化如何与整个过程相关联。赛默飞为过程的每一步都提供了解决方案。质粒设计可以从Gene Art质粒服务开始,而质粒生产则可以使用克隆和载体插入片段验证、转化和培养生长等技术。质粒纯化可以使用KingFisher PlasmidPro 全自动大规模质粒提取仪实现自动化,使用MagMAX Pro HT NoSpin 质粒小量制备试剂盒和KingFisher 纯化系统,或者 PureLink和Expi试剂盒手动进行。该工作流程可以通过克隆、哺乳动物细胞表达、转染和使用Gibco ExpiCHO等系统的蛋白质表达来完成。


    转染级质粒 DNA 纯化试剂盒

    转染级质粒分离试剂盒专为需要从细菌培养物中提取具有极低内毒素水平的质粒 DNA(pDNA)的科研人员设计。在质粒纯化过程中,大量内毒素从裂解细菌中释放出来,这会对细胞生长、细胞活力、转染效率、蛋白质表达产生负面影响,甚至模拟脓毒症。为了解决这些问题,我们专为低内毒素质粒 DNA 分离而设计的试剂盒能够仔细去除这些内毒素,有助于确保分离的质粒 DNA 的完整性。这些试剂盒提供了一种快速简便的质粒纯化方法,有助于为敏感的下游应用提供高纯度和高产量。无论您的制备规模是小还是大,我们的转染级质粒分离试剂盒都是根据您的特定需求量身定制的,使您能够获得可靠且可重复的结果。 

     Invitrogen PureLink 快速低内毒素纯化试剂盒Invitrogen PureLink HiPure 质粒试剂盒PureLink HiPure 质粒过滤试剂盒
     productproductPureLink HiPure Plasmid Filter Midiprep Kit
    可供选择的制备量中提大提小提中提大提超大量提取宏量提取中提、 大提
    纯度等级/内毒素水平转染级
    (0.1–1 EU/µg)
    转染级
    (0.1–1 EU/µg)
    转染级
    (0.1–1 EU/µg)


    高级转染级质粒 DNA 纯化试剂盒

    对于需要更高水平去除内毒素的科研人员,我们提供高级转染级质粒分离试剂盒。这些试剂盒超越了标准转染级试剂盒,提供了更高的内毒素去除水平,有助于确保分离的质粒 DNA 的极高纯度。使用我们高级转染级质粒分离试剂盒,您可以放心地执行要求极高质量 pDNA 的下游应用。这些试剂盒非常适合从事关键实验的研究人员,在这些实验中,即使是微量内毒素也会对其结果产生重大影响。使用我们的高级转染级质粒分离试剂盒可以帮助消除与内毒素相关的风险,获取纯质粒 DNA,用于您的科学研究。

     Thermo Scientific GeneJET 无内毒素质粒大提试剂盒Invitrogen PureLink Expi 无内毒素质粒纯化试剂盒
     productproduct
    可供选择的制备量Maxi大提超大量提取宏量提取
    纯度等级/内毒素水平高级转染级
    (<0.1 EU/µg)
    高级转染级
    (<0.1 EU/µg)


    分子级质粒纯化试剂盒

    为实现快速、简单和可靠的质粒纯化,我们的 Invitrogen PureLink 和 GeneJET 分子级质粒 DNA(pDNA)分离试剂盒可生产与一系列标准分子生物学应用兼容的即用型纯质粒。分子级试剂盒适用于细菌和酵母细胞的转化;然而,由于存在内毒素,可能不太适合敏感哺乳动物细胞的转染。对于转染应用,请参见上述转染级质粒纯化试剂盒。

     Invitrogen PureLink Pro Quick 96质粒纯化试剂盒Invitrogen PureLink Quick 质粒小提试剂盒Thermo Scientific GeneJET 质粒试剂盒
     productproductproduct
    可供选择的制备量小规模96孔板规格小型小提中提大提
    纯度等级/内毒素水平分子级
    (>10 EU/µg)
    分子级
    (>10 EU/µg)
    分子级
    (>10 EU/µg)


    用于质粒分离的其他缓冲液


    手工法质粒纯化操作视频

    自动化质粒纯化:如何操作

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      如何纯化高级转染级质粒DNA

      了解如何使用KingFisher PlasmidPro 全自动大规模质粒提取仪纯化高级转染级质粒DNA(pDNA)。转染级pDNA适用于大多数分子级应用,以及体外转录和转染。

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        如何收集质粒DNA、清洁卡盒和仪器

        观看关于KingFisher PlasmidPro仪器清洁和去污染过程的视频教程,包括如何清洁卡盒以及正确处理废弃物。

        使用 PureLink 和 GeneJet 试剂盒提取质粒 DNA

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          如何纯化无内毒素质粒 DNA

          观看此视频,了解如何使用 PureLink Expi 无内毒素大提质粒纯化试剂盒纯化质粒 DNA。本视频向您展示如何分离和纯化高质量、无内毒素的质粒 DNA,用于原代细胞转染等敏感应用。

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            如何纯化分子级质粒 DNA

            本视频向您展示如何使用我们的 GeneJET 质粒小提试剂盒在15分钟内纯化分子级质粒 DNA。分子级质粒 DNA 适用于克隆、核酸标记、PCR、DNA 测序和转化。

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              如何使用我们的超大量提取试剂盒纯化质粒 DNA

              使用 Invitrogen PureLink HiPure Expi 质粒超大量提取试剂盒在90分钟内分离转染级质粒 DNA。这些试剂盒中的创新型专有阴离子交换树脂结合了大容量、快流速、高分辨率和高效率。

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                  如何纯化转染级质粒 DNA

                  了解如何使用 Invitrogen PureLink HiPure 质粒过滤大提试剂盒纯化转染级质粒 DNA。转染级质粒 DNA 适用于大多数分子级应用,以及体外转录和转染。

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                  仅供科研使用,不可用于诊断目的。