PLUS™ 试剂

PLUS™ 试剂是一种与 DNA 预先形成复合物的具有专利技术的试剂，可增强阳离子脂质体介导的将 DNA 转染至许多培养的真核细胞中的过程。使用 PLUS™ 试剂可增强 Lipofectamine® LTX 试剂、Lipofectamine® 试剂、Lipofectin® 试剂、Cellfectin® 试剂和 Oligofectamine™ 试剂的转染结果。

转染指南

• PLUS™ 试剂可增强阳离子脂质体介导的转染；请勿单独使用 PLUS™ 试剂。
• PLUS™ 试剂可增强基于载体的 RNAi 实验，但不建议用于 siRNA 和 Stealth™ RNAi 转染。
• PLUS™ 试剂的效率取决于细胞系；可单独检测每个细胞系。
• 请访问 www.lifetechnologies.com/transfection 或联系技术服务部获取专业转染方案（包括细胞类型特定建议）。
• 有关更多转染指南，请参阅您的转染试剂随附的手册。
• 一些无血清培养基（如 CD 293 培养基、293 SFM II 和 VP-SFM）可抑制阳离子脂质体介导的转染。在使用前检测培养基与转染试剂的兼容性。

利用此程序使用 Lipofectamine® LTX 试剂和 PLUS™ 试剂将 DNA 转染至 24 孔规格板内的哺乳动物细胞中。对于其他规格，请参见“扩大或缩小转染规模”。所有用量均按每个孔计算。使用此程序作为起点；如“优化转染”中所述优化转染。

注：开始前请阅读转染重要指南和 Lipofectamine® LTX 试剂手册。

1. 贴壁细胞：转染前一天，在 500 μL 生长培养基中对细胞进行铺板，使细胞在转染时的汇合度达到 50-80%。悬浮细胞：在即将制备复合物之前，在 500 μL 生长培养基中对 200,000-500,000 个细胞进行铺板。


2. 对于每份转染样本，按下列步骤制备复合物：
   
   
   • a. 使用 100 μL 不含血清的 Opti-MEM® I 减血清培养基稀释 500 ng 质粒 DNA。轻轻混匀。
   
   
   • b. 使用前轻轻混匀 PLUS™ 试剂，然后将 0.5 μL PLUS™ 试剂直接加入稀释的 DNA 中。轻轻混匀，室温孵育 5-15 分钟。
   
   
   • 轻轻混匀 Lipofectamine® LTX 试剂，然后取 1.25 μL 直接加入稀释的 DNA 中。轻轻混匀。
   
   
   • 在室温下孵育 30 分钟。复合物在室温下稳定保存 6 小时。


3. 将约 100 μL DNA-Lipofectamine® LTX 复合物添加至含有细胞的孔内。通过来回摇动平板轻轻混匀。


4. 在进行转基因表达检测前，在 CO₂ 培养箱中于 37°C 下孵育细胞 18-48 小时。培养基可在 4-6 小时后更换。

利用此程序使用 Lipofectamine® 试剂和 PLUS™ 试剂将 DNA 转染至 24 孔规格板内的哺乳动物细胞中。对于其他规格，请参见“扩大或缩小转染规模”。所有用量均按每个孔计算。使用此程序作为起点；如“优化转染”中所述优化转染。

注：开始前请阅读第 1 页转染重要指南和 Lipofectamine® 试剂手册。

1. 转染前一天，在 24 孔板中对细胞进行铺板，使其在转染当天的汇合度达到 50-80%。在铺板时和转染期间，应避免使用抗生素。


2. DNA 与 Plus™ 试剂预先形成复合物：使用 25 μL 不含血清的稀释培养基（Dulbecco 改良 Eagle 培养基或类似培养基）稀释 0.4 μg DNA。使用前请混匀 Plus™ 试剂。向稀释的 DNA 中加入 4 μL Plus™ 试剂，重新混匀并在室温下孵育 15 分钟。


3. 在另一个管内使用 25 μL 不含血清的稀释培养基稀释 1 μL Lipofectamine® 试剂。


4. 混合预先形成复合物的 DNA（步骤 2）和稀释的 Lipofectamine® 试剂（步骤 3）；混匀并在室温下孵育 15 分钟。


5. 形成复合物时，将细胞培养基更换为 0.2 mL 不含血清的细胞生长培养基。注：  可以在此步骤将血清加入细胞生长培养基中。


6. 将 DNA-Plus™-Lipofectamine® 试剂复合物添加到含有新鲜培养基的细胞的各孔中。将复合物轻轻混合至培养基中；在 37°C 和 5% CO₂ 条件下孵育 3 小时。


7. 孵育 3 小时后，将培养基体积增加至正常体积；添加血清以使最终浓度达到正常生长培养基的浓度。如需尽可能促进细胞生长，请在孵育 3 小时后或转染后一天将含有复合物的培养基更换为新鲜完全培养基。


8. 根据细胞类型和启动子活性，在转染开始后 24-48 小时对细胞提取物或染色细胞的报告基因活性进行原位检测。

Plus™ 试剂还可用于增强使用 Lipofectin® 试剂、Cellfectin® 试剂和 Oligofectamine™ 试剂进行的转染过程。采用“使用 Lipofectamine® 试剂增强转染”中所述程序，但将 Lipofectamine® 试剂更换为您的转染试剂。使用您的转染试剂随附的手册中推荐的细胞密度和其他转染指南。

为获得较高转染性能，可改变 DNA、PLUS™ 试剂和脂质体的用量。考虑改变细胞密度。为优化使用 Lipofectamine® LTX 试剂和 PLUS™ 试剂进行的转染过程，我们建议 DNA（单位为 μg）与 PLUS™ 试剂（单位为 μL）的检测比例为 1:0.5、1:1 和 1:2。或者，保持 DNA:PLUS:LTX 比例恒定，但改变添加到各孔中的复合物的用量。有关更多建议，请参阅您的转染试剂随附的手册。

注：请访问 www.lifetechnologies.com/transfection，以了解细胞特定转染方案。

在以下方面对 PLUS™ 试剂进行了检测：

• 用血琼脂平板、沙氏葡萄糖琼脂平板和液体巯基乙酸盐培养基检测是否不存在微生物和真菌污染。
• 通过用报告基因质粒和 Lipofectamine® 试剂对人成纤维细胞进行转染来进行功能检测。

本产品在有限使用标签许可 5 的范围内：Invitrogen 技术（请参见 Life Technologies 货号或我们的网站 www.lifetechnologies.com）。使用本产品即表示您接受所有适用的有限使用标签许可的条款和条件。