使用 Lipofectamine LTX 试剂将质粒 DNA 转染到原代小鼠神经祖细胞中

Lipofectamine®  LTX 试剂是一种专有的无动物源性制剂，其细胞毒性较低，适用于将 DNA 转染到真核细胞中。本参考资料提供了使用 Lipofectamine®  LTX 试剂（货号 15338-100）将质粒 DNA 转染到原代小鼠神经祖细胞 (mNPC) 中的推荐步骤。

转染重要指南

使用 Lipofectamine®  LTX 试剂转染 mNPC 细胞时，请遵循以下重要指南：

• 在各实验之间保持相同的接种条件。使用低传代细胞；转染前确保细胞
  健康且细胞活力大于90%。
• NCP 生长为神经球，可贴附到培养板上，加入血清和胰岛素样生长因子后可分化为神经元、
  星形胶质细胞和少突胶质细胞。
• 转染既可在有血清的条件下进行，也可在无血清的条件下进行。检测无血清培养基与 Lipofectamine®  LTX 试剂的相容性。
• 使用 PLUS 试剂（货号 11514-015）可增强原代小鼠神经祖细胞中的转染性能。
• 我们建议，在络合之前使用 Opti-MEM® I 减血清培养基（货号 31985-062）稀释 DNA 和 Lipofectamine®  LTX 试剂。
• 关于其他专业转染方案，请访问 www.lifetechnologies.com/transfection 或联系技术服务部。
• Lipofectamine®  LTX 试剂在基于载体的 RNAi 实验中表现良好。对于 siRNA 和 Stealth™ RNAi 转染，我们建议使用 Lipofectamine® RNAiMAX（货号 13778-075）。有关更多信息，请访问 www.lifetechnologies.com/RNAi 或联系技术服务部。

需要的材料

开始前请准备好以下试剂：

• 在添加了 1% L-谷氨酰胺（GIBCO 货号25030）、1% 青霉素-链霉素（货号 15070-063）、
  1% 葡萄糖和表皮生长因子的 DMEM（GIBCO 货号 11960-044）培养基中维持培养的原代小鼠神经祖细胞 (NCP)。在 37℃、5% CO₂ 的条件下培养细胞。
• 感兴趣的质粒 DNA（100 ng/μL 或更高）
• Lipofectamine® LTX试剂（在 +4℃ 下储存直至使用）和 PLUS™ 试剂（在 4℃ 下储存）
• Opti-MEM® I 减血清培养基
• 适当的组织培养板和耗材

按照以下步骤将质粒 DNA 转染至24孔板中的原代小鼠神经祖细胞中。指定的所有数量和体积均以每个孔为基础。

1. 在24孔板中分化1天或7天后开始转染。
2. 转染当天，从细胞中吸走生长培养基，替换为 0.5 mL 不含抗生素的完全生长培养基。
3. 对于每个孔的待转染细胞，将0.25、0.50或 1.0 μg DNA 稀释到 100 μL 不含血清的 Opti-MEM® I 减血清培养基中。
4. 使用前轻轻混匀 PLUS™ 试剂，然后将 2.5 μL PLUS™ 试剂直接加入稀释后的 DNA 中。轻轻混匀并在室温下孵育 5-15 分钟。
5. 对于每个孔的细胞，将 0.1-2.50 μL Lipofectamine® LTX 试剂添加到上述稀释后的 DNA 溶液中，轻轻混匀并在室温下孵育30分钟，以形成 DNA-Lipofectamine®  LTX 复合物。
6. 孵育30分钟后，将 100 μL DNA-Lipofectamine® LTX 复合物直接添加到含有细胞的每个孔中，并轻轻来回晃动孔板使其混匀。
7. 转染后不必去除复合物。转染后，将细胞置于 CO₂ 培养箱中在 37°C 下孵育 18-24 小时，然后测定转基因表达。

注：

• 分化1天的 NPC 结果较佳（与分化7天相比）。
• 可得到优异结果的组合：

1.5 μL Lipofectamine LTX/2.5 μL PLUS/1.0 μg 质粒
2.5 μL Lipofectamine LTX/2.5 μL PLUS/500 ng 质粒