PI3K⁄AKT⁄mTOR 通路介导细胞生长和存活、转录和翻译以及调节的细胞死亡信号。最近通过鉴别两种不同的细胞复合物强调了 mTOR 的意义：mTORC1（包括 Raptor，且具有雷帕霉素敏感性）和 mTORC2（包括 Rictor，且对雷帕霉素敏感）。胰岛素（或其他促分裂原）激活通路导致程序性细胞死亡蛋白 4 (PDCD4) 通过 mTORC1（间接通过核糖体蛋白 p70 S6 激酶）发生磷酸化。LanthaScreen™ PDCD4 HEK293E 是一种组成性表达 GFP-PDCD4 融合蛋白的人细胞系。使用脂质转染引入该激酶靶标，然后使用杀稻瘟菌素进行选择。这些细胞是使用 GFP 荧光作为分选标志物通过 FACS 分离的克隆群体。使用基于 TR FRET 的检测方法，以 384 孔规格开发了均相免疫检测（“仅添加”，无洗涤步骤），以使用铽标记的磷酸特异性抗体监测 GFP-PDCD4 上的 Ser457 磷酸化。该测定已针对多种实验条件（如细胞平板接种密度、DMSO 耐受性、胰岛素刺激时间等）下的性能进行了优化，并显示出色的统计数据 (Z' > 0.6)。此外，该细胞系已使用不同刺激物和已知抑制剂（显示正确 EC50 和 IC50 值）进行了验证，并作为 mTORC1 信号转导的稳健细胞读数。