Thermo Scientific 活化 Ras 沉降和检测试剂盒能够通过与 Raf1 蛋白结合结构域的特异性蛋白相互作用选择性地富集和检测 GTP 结合 Ras GTPase。

活化 Ras 沉降和检测试剂盒包含纯化的 GST-Raf1 Ras 结合结构域 (RBD)、谷胱甘肽琼脂糖树脂、阳性和阴性对照品（分别为 GTPγS 和 GDP）、裂解/结合/洗涤缓冲液、抗 Ras 抗体、SDS 样品缓冲液、离心柱和收集管。该试剂盒使用 NIH 3T3 细胞的裂解物进行验证，已知该细胞系具有稳健的 Ras 活性。

活化 Ras 沉降和检测试剂盒的特点：

•高灵敏度和精确度—优化试剂、特异性抗 Ras 抗体和 Western 印迹程序可确保精确控制和半定量结果
•经验证—对 Ras 检测进行功能检测，以确保质量和性能
•兼容—可有效兼容小鼠、大鼠和人类来源的多种细胞类型

应用：
•追踪细胞分化、迁移、分裂和细胞骨架重排期间的 Ras GTPase 活化
• 研究活化 Ras 在癌症和血管新生中的作用
•监测使用生长因子刺激后的 Ras 活性
•筛查小分子抑制剂对 Ras 活性的影响

使用经用于活化内源性 Ras 的 GTPγS 处理的细胞裂解物相对于经灭活小 GTPase 的 GDP 处理的裂解物，验证了活化 Ras 沉降和检测试剂盒的活化 Ras 富集方法的功能和特异性。GTPγS 处理捕获 GTP 结合活化形式的 Ras，在存在内源性 Ras 时产生强烈信号。GDP 处理使 Ras 进入 GDP 结合的非活化状态，无论 Ras 蛋白水平如何均几乎不产生信号。对该试剂盒进行了优化，用于使用 HRP 偶联二抗（山羊抗小鼠 IgG，产品编号 31430）和 Thermo Scientific SuperSignal West Pico 化学发光底物（产品编号 34080）进行 Western 印迹检测。每个试剂盒均包含足够用于 30 次沉降实验的组成部分。

试剂盒组成部分也可用于免疫荧光染色。使用 NGF 刺激神经元 NS-1 细胞，以使用试剂盒中提供的 GST-RBD 蛋白和抗 Ras 抗体研究活化 Ras 的空间分布。

Ras 背景：
以大鼠肉瘤病毒致癌基因命名的 GTPase 的 Ras 超家族包含多种 Ras 同源异构体，包括 K-Ras、H-Ras 和 N-Ras。虽然三种同源异构体在不同细胞类型中的表达水平有所不同，但是一般而言，在所有癌症中 ∼15% 存在这些同源异构体中至少一种的激活突变。Ras 蛋白作为来自细胞外分子的细胞内信号转导的启动物，通过羧基端脂质修饰和异戊烯化与质膜相连接。这些羧基端的修饰决定了 Ras 在不同膜微结构域的定位，从而决定后续的下游信号转导。Ras 信号转导通路影响多种细胞过程，包括增殖、存活、囊泡运输和基因表达。

通过 Ras 进行的信号转导对多种细胞反应至关重要，且 Ras 的活化受到 GEF 和 GAP 蛋白的调控。GEF 蛋白通过将 GDP 从非活化 Ras 中解离来介导 GTPase 活化，以使 Ras 结合到 GTP 上。相反，GAP 蛋白通过将 GTP 水解为 GDP 灭活 GTPase。Ras 通过与效应蛋白（包括 Raf 和 PI3 激酶）相互作用来介导下游信号转导。Raf1 是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，是 MAP 激酶激酶信号转导通路的一部分，该通路可活化 ERK 和 p38，从而影响增殖和存活。PI3 激酶信号转导可使 AKT 和 mTOR 活化，这对细胞生长和存活至关重要。Ras 也是细胞分化和发育（包括免疫细胞发育和功能）的组成部分。

更多产品数据
•通过特异性下游效应子测定小 GTPase 的激活
•在神经元细胞分化过程中检测和定位活性 GTPase