活化 Cdc42 Pull-Down 和检测试剂盒

Thermo Scientific 活化 Cdc42 沉降和检测试剂盒是一种全套试剂盒，能够通过与 Pak1 蛋白结合结构域的特异性蛋白相互作用选择性地富集和检测 GTP 结合 Cdc42 GTPase。

活化 Cdc42 沉降和检测试剂盒包含纯化的 GST-Pak1 蛋白结合结构域 (PBD)、谷胱甘肽琼脂糖树脂、阳性和阴性对照品（分别为 GTPγS 和 GDP）、裂解/结合/洗涤缓冲液、抗 Cdc42 一抗、样品缓冲液、离心柱和收集管。该试剂盒使用 NIH 3T3 细胞的裂解物进行验证，已知该细胞系具有稳健的 Cdc42 活性。

活化 Cdc42 沉降和检测试剂盒的特点：

•高灵敏度和精确度—优化试剂、特异性抗 Cdc42 抗体和 Western 印迹程序可确保精确控制和半定量结果
•经验证—对 Cdc42 检测进行功能检测，以确保质量和性能
•兼容—对小鼠、大鼠和人来源的多种细胞类型有效

应用：
• 追踪细胞分化、迁移、分裂和细胞骨架重排期间的 Cdc42 GTPase 活化
• 研究丝状伪足形成期间 Cdc42 的活化
• 监测使用生长因子刺激后的 Cdc42 活性
• 筛查小分子抑制剂对 Cdc42 活性的影响

使用经用于活化内源性 Cdc42 的 GTPγS 处理的细胞裂解物相对于经灭活小 GTPase 的 GDP 处理的裂解物，验证了活化 Cdc42 沉降和检测试剂盒的活化 Cdc42 富集方法的功能和特异性。GTPγS 处理捕获 GTP 结合活化形式的 Cdc42，在存在内源性 Cdc42 时产生强烈信号。GDP 处理使 Cdc42 进入 GDP 结合的非活化状态，无论 Cdc42 蛋白水平如何均几乎不产生信号。对该试剂盒进行了优化，用于使用 HRP 结合型二抗（山羊抗小鼠 IgG，产品编号 31430）和 Thermo Scientific SuperSignal West Pico 化学发光底物（产品编号 34080）进行 Western 印迹检测。试剂盒所含成分均足够进行 30 次沉降实验。

Cdc42 背景：
Rho 家族 GTPase 具有许多细胞功能，包括细胞信号传导、转录调节和肌动蛋白细胞骨架的组织。该 GTPase 家族包括 Rho（RhoA、RhoB 和 RhoC）、Rac（Rac1、Rac2、Rac3 和 RhoG）、Cdc42（Cdc42 和 G25K）、Rnd（Rnd1、Rnd2 和 RhoE/Rnd3）、RhoBTB 家族和 Miro 家族。这些 GTPase 通过 GPCR、酪氨酸激酶、细胞因子和黏附受体实现从质膜到细胞溶质的信号转导。通过蛋白羧基末端的香叶酰香叶酰脂质修饰来实现与质膜的黏附。Cdc42 活化导致肌动蛋白微丝聚合和丝状伪足形成。

RhoGTPase 的 Cdc42 亚族与 Rho 和 Rac 家族相比未得到充分表征。Cdc42 和 Rac1 均通过酪氨酸受体激酶信号转导活化，导致 SAPK 和 p38 应激激酶通路激活。中性粒细胞中的化学引诱物 fMLP 也激活 Cdc42。纤连蛋白激活 Cdc42 和 Rac1 以诱导细胞伸展，用 TNF-α 和 IL-1 刺激可导致肌动蛋白细胞骨架发生变化。Cdc42 和 Rac1 之间存在显著的交叉串扰，因为它们在重叠的通路中起作用，在某些情况下，Cdc42 可能在信号转导过程中在 Rac1 上游起作用。Cdc42 的某些主效应蛋白为 Pak1、N-WASP 和 IQGAP。Pak1 是一种参与 SAPK 应激通路中 JNK 活化的激酶。N-WASP 是诱导丝状伪足形成的效应子，IQGAP 与 F-肌动蛋白微丝相互作用。在神经元分化中，Cdc42 在神经突增生中起积极作用。然而，GTPase 的 Rho 家族可在细胞信号转导期间发挥激动作用以及在分化期间发挥拮抗作用。

更多产品数据
•通过特异性下游效应子测定小 GTPase 的激活