EZ-Link™ 脱硫生物素化和 Pull-Down 试剂盒

Thermo Scientific EZ-Link 脱硫生物素化和沉降试剂盒是一整套用于对纯化蛋白进行生物素标记的试剂，可用于在温和洗脱条件下使用链霉素亲和素琼脂糖树脂纯化相互作用复合物。

EZ-Link 脱硫生物素化和沉降试剂盒的特点：

•Sulfo-NHS-LC-脱硫生物素 –使用生物素样试剂标记蛋白，该试剂可以特异性地结合链霉素亲和素，但也易于在温和的条件下洗脱
• 沉降检测 –方案和试剂简单且经过优化，可用于标记蛋白并回收（纯化）完整的功能蛋白相互作用复合物
•全套试剂盒 –包括标记试剂、用于制备诱饵蛋白的脱盐柱和用于进行沉降检测的链霉素亲和素琼脂糖和洗脱缓冲液

这种一体式标记和纯化试剂盒使用的是 Sulfo-NHS-LC-脱硫生物素，其是一种胺反应性 NHS 酯试剂，可有效标记纯化或混合蛋白样品，以便在捕获和纯化蛋白相互作用中用作诱饵蛋白。标记蛋白的脱硫生物素标签与链霉素亲和素结合，具有高特异性但容易在非常温和的条件下洗脱（即，方式为被常规的游离生物素竞争性置换）。该系统能通过使用链霉素亲和素琼脂糖微珠从细胞裂解物中有效而温和地捕获和分离（沉降）特异性蛋白相互作用复合物。该全套试剂盒包括即用型 1mg 样品瓶装脱硫生物素化试剂、用于处理标记蛋白的脱盐柱以及用于轻松执行多次微量离心机规模沉降检测实验的高容量链霉素亲和素琼脂糖以及缓冲液。确定已知蛋白（诱饵蛋白）与先前未发现的靶蛋白（猎物蛋白）之间的新相互作用，或确认已知诱饵蛋白和猎物蛋白之间的相互作用。

脱硫生物素是一种单环且无硫的生物素类似物，与生物素相比，与链霉素亲和素结合时的特异性几乎相等，但亲和力较低（分别为 1/Kd = 10¹¹ vs. 10¹⁵M）。因此，基于与游离生物素的竞争性置换，可以使用温和的条件，从链霉素亲和素亲和树脂中很容易且具有特异性地将脱硫生物素化诱饵蛋白及其相互作用配偶体洗脱出来。对于使用生物样品进行的沉降检测实验，脱硫生物素的这种软释放特点也有助于尽可能减少内源性生物素化分子的共纯化，在洗脱靶蛋白复合物与游离生物素时这些分子仍与链霉素亲和素结合。通过经修饰的亲和素-生物素亲和系统，也无需使用可能分离复合物和/或破坏靶蛋白或细胞的苛刻洗脱条件。脱硫生物素技术是使用不表达融合标签的天然或重组蛋白或在天然条件下分离捕获蛋白的理想选择，例如靶向完整细胞或细胞表面蛋白时。

Sulfo-NHS-LC-脱硫生物素是一种生物素变体，其可以活化为具有长链 (LC) 间隔臂的 sulfo-NHS 酯，可通过脱硫生物素基团共价标记蛋白或其他分子的伯胺 (-NH2)。No-Weigh 规格（1 mg 可重复密封的样品瓶）消除了称量少量试剂的困难，并尽可能保护未使用试剂免受水解影响。

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