Pierce™ RNA 3' 端生物素化试剂盒

Thermo Scientific Pierce RNA 3' 端生物素化试剂盒经过优化可用于标记 RNA 探针的 3 主要末端，以便在 EMSA 及其他方法中将其用作研究蛋白-RNA 相互作用的探针或靶标。

RNA 3' 端生物素化试剂盒的特点：

•无放射性—掺入与化学发光检测系统一起使用时检测灵敏度与放射性方法相似的生物素标记
• 快速—RNA 可在 0.5-2 小时内标记，且下游处理极少
• 易于使用—包括 RNA 连接酶和优化的反应缓冲液
• 经济—成本远远低于采购合成生物素化 RNA 探针的价格
• 末端标记—对 RNA 二级结构的影响非常小
• 灵活—标记合成或体外转录的 RNA 探针核苷酸范围为 22—450

该全套试剂盒包含用作阳性对照品的未标记 RNA 链、生物素化 RNA 探针标准品、RNase 抑制剂、糖原和连接增强试剂。

RNA 3' 端生物素化试剂盒使用 T4 RNA 连接酶偶联核苷类似物与 RNA 链的 3' 端。该试剂盒中独特的生物素化胞苷（双）磷酸盐使 T4 RNA 连接酶能将不同二级结构和长度的 RNA 探针连接起来，效率高于 > 70%。

使用 RNA 3' 末端生物素化试剂盒进行的标记反应通常需要 50 pmol RNA 和超过 20 倍的生物素化核苷酸在 16°C 下反应 2 小时。可在 37°C 下对具有最小二级结构的较短 RNA 探针进行 30 分钟连接（例如 RNA 聚合酶 RNA 模板）。大结构或结构复杂的 RNA 探针（例如 Let-7 和 hTR）需要更长的孵育时间。通过改变 RNA 与生物素化胞苷的比率来优化复杂 RNA 分子的生物素化效率、增加孵育时间或在标记反应中加入 DMSO 来使 RNA 结构变性。

RNA 生物素化反应后，已标记 RNA 易于沉淀，从而去除反应副产物。生物素标记使 RNA 探针能够固定化或通过链霉素亲和素检出，以便研究 RNA 相互作用（即 RNA 电泳迁移率变动实验、RNA 沉降实验）或进行无放射性印迹实验（即 Northern 印迹和 miRNA 谱分析）。