Pierce™ 磁性 RNA-蛋白 Pull-Down 试剂盒

Thermo Scientific Pierce 磁性 RNA-蛋白沉降试剂盒为研究人员提供了一种简化、稳健的方法，使用末端标记 RNA 作为诱饵来富集蛋白-RNA 相互作用。

磁性 RNA-蛋白沉降试剂盒的特点：

•直接 – 使用末端标记 RNA 直接捕获核糖核蛋白复合物；沉降时不使用或不需要抗体
•易于使用– 富集 RBP 时不需要使用离心杯或离心；简化了程序，完成 RNA 标记反应后仅需极少的手动操作时间（小于 3 小时）
•灵活– 使用体外转录 RNA 或合成 RNA 进行各种长度和复杂性的标记；使用内源性、过表达和体外翻译裂解物成功富集的蛋白
•特异性– 磁珠背景噪音低；无关 RNA 或突变 RNA 不会显著影响特定 RBP 的富集
•经济– 价格低于单独购买商业合成的末端标记 RNA、磁珠和试剂
•全套– 含有标记模块和富集模块，模块中带有检测所需的缓冲液；包括阳性对照 RNA、阴性对照 RNA 以及 RBP 抗体

磁性 RNA-蛋白沉降试剂盒提供了使用以脱硫生物素末端标记的 RNA 高效富集 RNA 结合蛋白 (RBP) 的试剂以及链霉素亲和素磁珠。全套试剂盒中包含的试剂足够进行 20 次 RNA 标记反应和 20 次蛋白-RNA 沉降分析。这种直接富集蛋白-RNA 相互作用的方法可以替代蛋白-RNA 复合体或核酸嵌入蛋白的抗体捕获法。本试剂盒的另一个优点是，它为标记反应和沉降分析均提供了经验证的质控品。该试剂盒适于进行多种下游应用，包括 Western 印迹和质谱 (MS)。

包括：
全套试剂盒中包含 Pierce RNA 3'-端脱硫生物素化试剂盒、阳性和阴性 RNA 对照品、核酸兼容性链霉素亲和素磁珠以及 RBP 富集和洗脱缓冲液

需要：
用户提供的 RNA 和裂解物（实验样品）

应用：
• 突变分析
• 结构功能分析
• RNA 与蛋白相互作用的鉴别
• 未知 RNA:蛋白结合对或复合物的 MS 分析

使用标记 RNA 作为诱饵来富集 RNA-结合蛋白优于抗体富集，因为其直接捕获相互作用。本试剂盒中包括 Pierce RNA 3'-末端脱硫生物素化试剂盒，其使用 T4 RNA 连接酶将单个胞苷二磷酸核苷酸连接至单链 RNA 的 3'-末端。脱硫生物素既可用作检测靶标，也可用作可洗脱亲和柄。核苷酸与脱硫生物素之间的间隔臂长度已经过优化处理，可高效连接至微珠上，而不会阻碍 RNA 与蛋白的结合。

RNA 结合蛋白富集的程序已经过优化，易于使用。先将标记好的 RNA 捕获到微珠上，以作好结合蛋白的准备。将结合了 RNA 的微珠放入蛋白 RNA 结合缓冲液中进行平衡，然后加入蛋白裂解物。洗涤之后，使用非变性生物素洗脱缓冲液或 SDS-PAGE 上样缓冲液洗脱样品。洗脱后的样品即可进行各种下游操作，包括 Western 印迹或质谱分析。

沉降检测的控制系统包括雄激素受体 (AR) RNA 的 3'-非翻译区、poly(A)25 RNA 以及哺乳动物细胞裂解物。雄激素受体 RNA 的近端 3'-非翻译区 (UTR) 中包含多个富含 UC 的区域，可结合 HuR 以及 Poly(C) 结合蛋白质（CP1 和 CP2）。这些 RNA 结合蛋白可调节 mRNA 的稳定性 (HuR) 以及 mRNA 的代谢和翻译（CP1 和 CP2）。阴性对照 RNA 和 poly(A)25 RNA 中并不包含 HuR 或 poly(C) BP 的结合位点。

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