Thermo Scientific Pierce 蛋白 A 琼脂糖树脂是标准结合容量的蛋白 A 微珠状琼脂糖树脂,适用于多种抗体的亲和纯化方法。本产品由含有 1 mL 树脂的 5 个 5 mL 色谱柱组成。
蛋白 A 琼脂糖的特点:
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天然蛋白 A—固定化蛋白 A 适用于从人、兔、猪、犬或猫血清中进行多克隆 IgG 纯化
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琼脂糖树脂—支持物为交联 6% 微珠状琼脂糖 (CL-6B),这是蛋白亲和纯化方法较常用的树脂
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惰性且稳定—优异的生产方法通过不带电荷的抗浸出性共价键固定蛋白 A,因此非特异性结合较低且能够多次使用而不降低得率
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标准容量—Pierce 蛋白 A 琼脂糖包含正常上样量的固定化蛋白 A,提供12–19 mg 人 IgG/mL 树脂(约6–8 mg 小鼠 IgG/mL 树脂)的结合容量
Pierce 蛋白 A 琼脂糖包含共价固定至高质量交联 6% 微珠状琼脂糖上的纯化天然蛋白 A。琼脂糖微珠的物理和化学特性适用于各种批次或柱类型亲和纯化程序。
蛋白 A 是由多种
金黄色葡萄球菌菌株生成的一种细胞壁组分。蛋白为46.7kDa 的单链多肽,基本上不含碳水化合物。天然蛋白 A 包含四个高亲和力 (Ka= 10^8/mol) 结合位点,能够与选定哺乳动物物种的 IgG 类抗体 Fc 区相互作用。IgG 结合功能在 pH 值 8.2 时最佳,但在中性和生理缓冲液(pH 值 7.0 至 7.6)也可高效结合。
蛋白 A 是一种源自细菌的蛋白,对抗体(尤其是 IgG 类抗体)的 Fc 部分具有高亲和力和特异性。与其替代品(蛋白G)相比,蛋白A对兔、猪、狗和猫的 IgG亚类结合力最强。蛋白A对人IgG也具有较高的结合力,但对IgG3的结合力很弱。蛋白 A 与小鼠 IgG1 的结合作用也较弱,因此不推荐用于大多数包含该抗体同种型的应用。
Pierce 蛋白 A 琼脂糖使用 Thermo Scientific AminoLink 偶联化学法制备,该方法与传统配基固定方法相比具有多项优势。AminoLink 固定后,琼脂糖珠的糖单体与蛋白 A 上的天然赖氨酸残基通过简单的酰胺键结合。与典型的溴化氰 (CNBr) 固定法不同,AminoLink 方法不引入任何新的化学基团,从而避免了可能导致的非特异性结合,并且形成基本不可逆的稳定结合。所得的高结合容量树脂在多轮抗体纯化之后仍然能保留固定化蛋白 A 的结合功能。
交联 6% 微珠状琼脂糖 (CL-6B) 的特性:•支持 pH 值稳定性:2 至 14(短期);3 至 13(长期)
• 平均粒径:45 至 165 微米
• 排阻极限:10,000至4,000,000 道尔顿
•最大体积流速:约1 mL/分钟(对于1 cm 直径柱)
•最大线性速度:30 cm/h
• 最大压力:低于 25psi (1.5 bar);定义为树脂可承受的跨色谱柱最大压降(注:液相色谱装置的指示表压可能测量的是总系统压力,而不是跨色谱柱压降。)
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