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Pierce™ 重组蛋白 G
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在免疫检测和抗体纯化方案中,纯化(未结合)Thermo Scientific Pierce 重组蛋白 G 可作为制备用于检测或纯化兔和人抗体(特别是 IgG 同种型)的各种探针或亲和基质的基础。
重组蛋白 G 的特点:
•每个蛋白含有两个 Fc 结合结构域 • 对于小鼠(包括 IgG1)、人(包括 IgG3)以及大鼠、山羊和牛抗体,优于蛋白 A • 对于豚鼠、猪、犬和猫,弱于蛋白 A • 不结合人 IgM、IgD 或 IgA
蛋白 G 是一种从 G 群链球菌中分离得到的细菌细胞壁蛋白。天然蛋白 G 的 DNA 测序可鉴定两个 IgG 结合结构域以及白蛋白和细胞表面结合位点。白蛋白和细胞表面结合结构域已从重组蛋白 G 中消除以减少非特异性结合,因此,可用于从粗样品中分离 IgG。理想结合发生在 pH 5条件下,尽管在 pH 7.0 - 7.2条件下结合也有效。
由于对于大多数哺乳动物 IgG,蛋白 G 比蛋白 A 具有更高亲和力,它可用于纯化不能与蛋白 A 很好结合哺乳动物 IgG。蛋白 G 与多个 IgG 亚型(如人 IgG3、小鼠 IgG1 和大鼠 IgG2a)结合的容量明显高于蛋白 A。但是,蛋白 G 不与人 IgM、IgD 和 IgA 结合。蛋白 A 和蛋白 G 之间的结合特性差异可通过各个蛋白的 IgG 结合位点的不同成分加以解释。这些蛋白的三级结构非常相似,尽管它们的氨基酸成分显著不同。
报告的 IgG 与蛋白质 G 的结合特性存在不一致。蛋白 G 的分离和生产方法差异可能影响 IgG 结合,部分原因是在不同来源的蛋白 G 上存在不同数量的 IgG 结合位点。已使用天然蛋白 G 和多种不同的重组形式进行了结合研究。已使用几种测定方法来确定相对亲和力,包括放射标记实验和 ELISA 技术。亲和测定的不同或许可以解释部分的不一致。此外,使用不同的缓冲液时,会有明显的结合差异。与20 mM Tris 缓冲液 (pH 7.5) 相比,当使用蛋白 G 结合缓冲液时,与蛋白 G 结合的大鼠血清 IgG 约增加 44%。