BigDye XTerminator™ 纯化试剂盒可为 DNA 测序反应提供快速、简单的纯化方法,用于去除未结合的 BigDye™ 终止子和盐离子。再也没有染料团!纯化过程可在 40 分钟内完成,而手工操作时间一般短于 10 分钟。
• 只需使用一块孔板–无需进行移液操作。
• 可完全去除染料团。
• 在分析前稳定样品。
• 改善您的测序流程。
•采用手动或自动协议。
• 快速获取可靠、可重复的结果。
简单的纯化过程 传统的纯化方法(如乙醇沉淀)需要添加多种试剂,还需要进行倾倒和离心步骤。BigDye XTerminator™ 纯化试剂盒只需加入两种试剂,而该两种试剂可以依次添加或预混合:
• XTerminator™ 溶液 – 可清除测序后反应中未结合的染料终止子和游离盐离子。
• SAM™ 溶液 – 可提高 Xterminator™ 溶液的性能,稳定纯化后反应。
实验方案非常简单(见图 1):1.使用 BigDye™ 终止子执行循环测序。
2.循环测序后,对反应板进行短暂离心,然后用移液器将正确体积的 SAM™ 溶液吸取至每个板孔中。
3.用移液器将正确体积的 XTerminator™ 溶液吸取至各个孔中:
4.短暂地涡旋振荡 XTerminator™ 溶液散装容器。
5.使用大口径移液器吸头(推荐的大口径吸头)将正确体积的液体吸取至每个板孔中
6.使用热封板膜或透明粘性封板膜 (P⁄N 4306311) 将板密封。涡旋振荡 30 分钟(推荐的 96 孔微孔板涡旋仪和 384 孔微孔板涡旋仪),然后对反应板进行短暂离心。
7.将反应板放入 Applied Biosystems DNA 分析仪中。选择运行模块和运行板。
极高的长片段回收率使用 BigDye XTerminator™ 纯化试剂盒时,对序列长度毫无影响。’图 2 显示了由加拿大萨斯卡通植物生物技术研究院 (NRC-PBI) 的 DNA 技术单位提供的数据。Q20 碱基读长 = 1044 bp。
短片段回收率提高使用 BigDye XTerminator™ 纯化试剂盒可获得更高质量的数据。图 3 显示了 BigDye XTerminator™ 纯化试剂盒与在加拿大萨斯卡通植物生物技术研究院 (NRC-PBI) 的 DNA 技术单位进行的基于乙醇沉淀的纯化之间的结果比较。BigDye XTerminator™ 纯化试剂盒可实现极高的短片段回收率。乙醇纯化所产生的序列数据被染料团破坏。
稳定性提高密封的反应板在室温下可稳定保存 48 小时,在 4°C 下则可保存 10 小时。若发生电源中断和计算机故障等情况,您可以重新运行同一份样品,而无需重复进行实验。这样可以提高在 CE 仪器上加载反应板的操作灵活性。
运行可用模块Applied Biosystems 提供可下载的运行模块,可与 BigDye XTerminator™ 纯化试剂盒和数据采集软件配合使用。这些模块设计用于 3100、3100–Avant(带数据采集 v2.0 或更高版本软件)、3130⁄3130xl,以及 3730⁄3730xl 分析仪。用于 BigDye XTerminator™ 纯化试剂盒的软件模块兼容 Windows™ 2000 和 Windows™ XP 操作系统,可从我们的软件下载页面获取:
用于基因分析的 Applied Biosystems 集成系统› 仅供研究使用。不适用于诊断用途。