TaqMan™ Fast Cells-to-C_T™ 试剂盒

TaqMan™ Fast Cells-to-C_T™ 试剂盒可使用快速循环、实时荧光定量 PCR 化学和仪器直接利用培养细胞进行基因表达分析而无需 RNA 纯化。

TaqMan™ Fast Cells-to-C_T 试剂盒：

• 完整 — 优化的工作流程包括去除 gDNA 的细胞裂解试剂、RT 酶混合物、RT 缓冲液和 TaqMan™ Fast 通用 PCR 预混液
• 快速 — 在室温下于7分钟内制备样品，包括 DNase 处理；TaqMan™ Fast 通用 PCR 预混液在约35分钟内提供实时荧光定量 PCR 结果
• 便利 — 裂解样品置于管中或直接置于96或384孔培养板中
• 稳健 — 可对每个样品的10至100,000个细胞进行基因表达分析，结果与使用纯化 RNA 相当
• 高效 — 含有足以生成500个实时荧光定量 PCR 结果的试剂（起始样品量为100份）

经验证的完整解决方案
TaqMan™ Cells-to-C_T™ 技术采用一种独特的培养细胞裂解方法，可在去除基因组 DNA 的同时保留 RNA 的完整性，此外，该试剂盒含有用于 Fast 实时荧光定量 PCR 分析的逆转录 (RT) 试剂和 TaqMan™ Fast 通用型 PCR 预混液，并已通过金标准 TaqMan™ 基因表达检测试剂盒（单独出售）进行了广泛检测和验证。对所有试剂盒组分进行了优化，以实现一致和可靠的性能，消除了组装用于样品制备、逆转录和 Fast 实时荧光定量 PCR 的单独试剂盒所涉及凭猜测所作之工作。

快速、方便的工作流程
TaqMan™ Fast Cells-to-C_T™ 试剂盒包含一个简单的 7 分钟样品制备程序（见图），可直接在 96 或 384 孔培养板或试管中与 10 至 100,000 个培养细胞配合用。在 PBS 悬液中洗涤细胞，置于室温下裂解 5 分钟；同时进行可选 DNase 处理。裂解过程在加入终止液，室温孵育2分钟后被终止。该试剂盒大大简化了传统的耗时、劳动密集型工艺，并将其缩短至 7 分钟。

裂解物现已准备好使用试剂盒中包含的优化 RT 系统进行逆转录，或可在 -20°C 下储存长达 5 个月，以供将来分析。所提供的 TaqMan™ Fast 通用型 PCR 预混液可提供灵敏和可重现结果，速度是标准 PCR 试剂和仪器的大约 3 倍。快速、简单样品制备以及快速循环实时荧光定量 PCR 结果（约35分钟）的组合可比先前的方法更快速定量基因靶标。与传统的 RNA 纯化和标准实时荧光定量 PCR 相比，TaqMan™ Fast Cells-to-C_T™ 试剂盒工作流程将从样品到结果的时间缩短 40% 或更多。

稳健、灵敏且可靠的结果
可对不同表达水平基因的广泛样品起始量进行准确的基因表达分析，这在传统上对研究人员而言是一种挑战。因此，耐用溶液对于对少数或多个细胞的 RNA 谱分析非常重要。所示证明了使用来自 TaqMan™ Fast Cells-to-C_T™ 试剂盒的裂解物在 5 log 细胞起始量（每次裂解反应 10–10⁵ 个细胞）中观察到的出色信号呈线性 (R2 = 0.997)（见图）。因此，单一试剂盒可用于有限或致密样品的基因表达分析，不会因 PCR 抑制剂导致数据完整性受损。

使用 TaqMan™ Fast Cells-to-C_T™ 试剂盒的细胞裂解物的 PCR 性能与使用提供的 TaqMan™ Fast 通用型 PCR 预混液纯化 RNA 的性能相当（见图）。TaqMan™ Cells-to-C_T™ 试剂盒裂解物和纯化 RNA 对5个数量级的细胞上样等效物进行线性检测。在使用相同逆转录和 PCR 试剂时，TaqMan™ Fast Cells-to-C_T™ 试剂盒裂解物在10细胞上样量时的灵敏度高于纯化 RNA，因为在制备期间更高效地保留靶标分子，即没有与样品转移或加热过程相关的 RNA 损失。

相对于采用竞争对手 Q 的 RT 和 Fast 预混液逆转录并 PCR 扩增的纯化 RNA，TaqMan™ Fast Cells-to-C_T™ 试剂盒也具有更出色的性能。在使用竞争对手 Q 的试剂和快速循环时观测到的动态范围为10²至10⁵个细胞等效物，或比 TaqMan™ Cells-to-C_T™ 试剂盒裂解物或采用 TaqMan™ Fast 通用 PCR 预混液扩增的纯化 RNA 低1个数量级（如图所示）。TaqMan™ Fast 通用 PCR 预混液制剂可比标准试剂和仪器更快地提供灵敏、可重现结果，在较广的靶基因和浓度范围内保持稳健性能。