更出色的 BrdU 替代方法,提供更优结果 更准确的增殖分析方法可直接测量 DNA 合成。最初,这是通过掺入放射性核苷(即 3H-胸苷)来完成的。随后基于抗体的溴脱氧尿苷(BrdU,核苷类似物)法取代了这种检测方法。Click-iT™ EdU 流式细胞术检测试剂盒是替代 BrdU 检测的新方法。EdU(5-乙炔基-2´-脱氧尿苷)是胸苷类似物,可在活跃的 DNA 合成过程中掺入 DNA 中。检测基于点击化学:一种在叠氮化物和炔烃之间的铜催化共价反应。在该应用中,在 EdU 的乙炔基团中发现了炔烃,而叠氮化物偶联至 Alexa Fluor™ 488、Alexa Fluor™ 647 或 Pacific BlueTM 染料。标准流式细胞分析方法用于检测细胞群中 S 期细胞的比例(图 1)。
温和的条件允许与细胞周期染料和抗体配合使用 在进行检测时,Click-iT™ EdU 标记的优势显而易见(图 2)。在温和条件下,小分子叠氮染料高效地与掺入的 EdU 反应,然后采用标准醛基固定,洗涤剂透化,从而使 Click-iT™ Plus 检测试剂检测出 DNA。这与 BrdU 检测相反,BrdU 检测需要使用 HCl、加热或用 DNase 消化变性 DNA,使 BrdU 暴露以便用抗 BrdU 抗体检测。BrdU 检测的样品处理会改变细胞周期分布的信号变化,且使用 HCl 方法会破坏抗原识别位点。相反,易于使用的 EdU 细胞增殖试剂盒与细胞周期染料兼容。本款 EdU 检测试剂盒还可结合表面和细胞内标记物的抗体进行多重分析。
快速简便的实验方案 Click-iT™ EdU 方案基于免疫组化抗体标记的醛基固定和洗涤剂透化步骤,但 EdU 与其他 固定剂/透化剂(包括皂苷和甲醇)兼容。只需五步就能分析细胞增殖数据:’