CellEvent™ 半胱天冬酶-3/7 检测试剂

CellEvent Caspase-3/7 Green 和 CellEvent Caspase-3/7 Red 检测试剂是新型荧光底物，适用于活细胞中活化的半胱天冬酶-3/7，这些活细胞可固定并通过免疫荧光 (IF) 和免疫细胞化学 (ICC) 等抗体检测工作流程进行多通路检测。半胱天冬酶-3 的活化是细胞凋亡过程中的重要事件，因此这些经优化的试剂可用于分析凋亡细胞。CellEvent Caspase-3/7 Red 检测试剂也可用于检测 GFP 表达细胞中的细胞凋亡。

这些指示剂的特点包括：
•用于细胞凋亡分析的经优化半胱天冬酶-3/7 底物
• 易于使用—只需加入和读取；无需细胞裂解
• 用于时程测量；易于选择目标时间点
• 与活细胞荧光成像和甲醛固定法兼容
• 支持多通道检测—与其他荧光试剂结合，证实同一细胞或细胞群中的细胞凋亡

CellEvent™ 半胱天冬酶-3/7 绿色检测试剂：最大吸收/发射波长 ∼502/530 nm。可使用 FITC/GFP 传统滤光片组进行检测。

CellEvent™ 半胱天冬酶-3/7 红色检测试剂：最大吸收/发射波长 ∼590/610 nm。可使用传统 Texas 红色滤光片组进行检测。

CellEvent™ 半胱天冬酶-3/7 红色检测试剂和 CellEvent™ 半胱天冬酶-3/7 绿色检测试剂以干粉形式提供。仅需向干粉中加入 100µL PBS 即可制备 100X 储备液。用完全培养基按 1:100 的比例稀释该 100X 储备液，染色细胞 30-60 分钟，然后用荧光显微镜分析。

CellEvent™ 半胱天冬酶-3/7 红色检测试剂也以即用型 DMSO 溶液形式提供。DMSO 溶液为 400X 即用型储备液。仅需用生长培养基按 1:400 的比例稀释该储备液，然后染色细胞 30-60 分钟。

为了防止凋亡细胞被洗掉，染色结束时无需洗涤。染色细胞可进行活分析或用 4% 多聚甲醛溶液固定，例如含 Image-IT™ 多聚甲醛 4% 的 0.1M 磷酸盐缓冲液 (pH 7.4)（货号：I28800）。这些固定细胞可以进一步处理，以用于 ICC 工作流程。

底物特异性
CellEvent 半胱天冬酶-3/7 检测试剂是与核酸结合染料偶联的四氨基酸肽 (DEVD)。DEVD 肽序列是半胱天冬酶-3/7 的切割位点，并且偶联的染料不发出荧光，直到从肽上断裂并与 DNA 结合为止。

作用机制
由于 DEVD 肽可抑制染料与 DNA 结合的能力，CellEvent 半胱天冬酶-3/7 绿色检测试剂本身不发出荧光。然而，凋亡细胞中半胱天冬酶-3/7 激活后，DEVD 肽断裂，使染料能够结合到 DNA 上并反应产生明亮的荧光。

简易的三步方案
使用 CellEvent 半胱天冬酶 3/7 检测试剂，只需将其添加到细胞中，孵育 30–60 分钟，即可进行观察。含已激活半胱天冬酶-3/7 的凋亡细胞具有明亮的绿色或红色细胞核，而不含已激活半胱天冬酶 3/7 的细胞只发出微弱的荧光信号。

测定的多功能性可实现对活细胞进行检测和固定
该稳健的测定使研究人员能够对活细胞中半胱天冬酶-3/7 的激活进行检查。此外，由于清洗步骤不是检测所必需的，通常在清洗步骤丢失的脆弱的凋亡细胞会被保存。重要的是，CellEvent 半胱天冬酶 3/7 检测试剂发出的荧光信号可在固定和透化过程中保存下来。这允许灵活地进行终点测定，并使用免疫细胞化学方法探测其他关注的蛋白质。