Fluo-4，AM，细胞可透过性

标记钙指示剂是结合 Ca²⁺ 离子后荧光强度增加的分子。Fluo-3 应用在流式细胞分析上，如涉及笼状螯合剂光活化、第二信使和神经递质的实验以及细胞水平的药理学筛选，用于 Ca²⁺ 的空间动力学成像。Fluo-4 是 fluo-3 的类似物，其中两个氯取代基被氟取代，导致在 488 nm 波长处的荧光激发增强，因此荧光信号水平更高。将溶解后的指示剂直接加入含有培养细胞的培养皿中，即可向细胞上样 AM 酯形式的这类钙离子指示剂。这些指示剂适用于荧光和共聚焦显微镜、流式细胞分析和微孔板筛选应用。

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钙指示剂（AM 酯）规格：
•标签（Ca²⁺– 结合形式的激发/发射波长）：Fluo-4 (494/506 nm)
• 结合 Ca²⁺ 后荧光强度增加：>100 倍
•_缓冲液中 Ca²⁺ 的 Kd：∼335 nM
• 结合 Ca²⁺ 后，荧光增加，波长稍有变化

使用 TPEN 控制重金属阳离子
此外，基于 BAPTA 的指示剂可结合多种重金属阳离子（例如 Mn²⁺、Zn²⁺、Pb²⁺），亲和力远高于 Ca²⁺。可以使用重金属选择性螯合剂 TPEN 来控制由这些离子引起的钙测量值扰动。

荧光钙指示剂的更多选择
我们提供大量的 Molecular Probes™ 钙指示剂供各种实验场景选择使用。更多信息请参阅《Molecular Probes™ 手册》中的可见光激发的荧光 Ca²⁺ 指示剂—第 19.3 节。

对于紫外激发的 Ca²⁺ 指示剂、基于蛋白的 Ca²⁺ 指示剂、Ca²⁺ 指示剂的偶联物以及其他金属离子（即 Mg²⁺、Zn²⁺）的荧光指示剂，请参阅《Molecular Probes™ 手册》中的 Ca²⁺、Mg²⁺、Zn²⁺ 以及其他金属离子指示剂—第 19 章。

我们推荐使用高质量的无水 DMSO 进行溶解，以达到 1 到 5 mM 储备液浓度。