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CloneJET™ PCR 克隆试剂盒,含 DH10B 感受态细胞
Thermo Scientific™
CloneJET™ PCR 克隆试剂盒,含 DH10B 感受态细胞
货号:
K123240
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K123240
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40 reactions
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该包装包括 CloneJET PCR 克隆试剂盒(20 或 40 次反应)和 DH10B 感受态细胞,这些细胞经过优化可与试剂盒配合使用,并可直接使用连接产物转化。
CloneJET PCR 克隆试剂盒
Thermo Scientific CloneJET PCR 克隆试剂盒是一种先进的阳性选择系统,可用于使用任何耐热 DNA 聚合酶所产生的 PCR 产物的高效克隆。也可以克隆任何平末端或黏性末端 DNA 片段。该试剂盒可用于磷酸化和非磷酸化 DNA 片段。只需五分钟即可连接至包括的阳性选择载体,并获得超过 99% 的重组克隆。将由校正性酶生成的平末端 PCR 产物直接接入克隆载体。
在连接前五分钟反应时间内使用试剂盒提供的耐热 DNA 平末端化酶需将由非校正 DNA 聚合酶或 DNA 聚合酶混合物生成的 PCR 产物处理成平末端。DH10B 感受态细胞经过优化,可与 CloneJET PCR 克隆试剂盒配合使用,并可直接使用连接产物转化。
CloneJET PCR 克隆试剂盒含有新型即用型阳性选择克隆载体 pJET1.2/blunt。该载体中有一个致命型限制性酶基因,此基因在 DNA 插入片段接入克隆位点后即被破坏。因此,只有含重组质粒的细菌细胞才能形成菌落。不含插入片段的重新环化的 pJET1.2/blunt 载体分子会表达致死性限制性内切酶,继而在转化后杀死宿主大肠杆菌细胞。这种阳性筛选大大加快了菌落筛选的进程,节省了蓝白斑筛选所需的额外成本。
•
快速
— 在仅五分钟内完成 PCR 克隆
•
极高效率
— >99% 阳性克隆体
•
无克隆背景
— 阳性选择载体
•
通用
— 适用于平末端或黏性末端克隆
•
经济
— 无需进行昂贵的蓝/白斑筛选
应用包括:
•克隆长达 10 kb 的平末端或 3' dA 加尾 PCR 产物
• 克隆由限制性内切酶生成的 DNA 片段
• 克隆 DNA 测序
• 利用 T7 启动子对克隆插入片段进行体外和体内转录
了解更多关于 CloneJET PCR 克隆试剂盒的信息 ›
DH10B 感受态细胞
Thermo Scientific DH10B 感受态细胞是高效的化学感受态大肠杆菌细胞。该 DH10B 株适于克隆含甲基胞嘧啶和甲基腺嘌呤的 DNA,可高效克隆原核和真核基因组 DNA。这些细胞适用于使用质粒衍生载体构建 cDNA 文库。基因型:F– mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ (ara-leu)7697 galU galK λ– rpsL(StrR) nupG。
•高转化效率:>1 x 109 cfu/µg pUC19 DNA
• 适用于常规和高通量克隆应用
• 便利,每瓶包装可进行两次反应
• S.O.C.含外生长培养基
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CloneJET PCR 克隆试剂盒(不含感受态细胞)
aLICator LIC 克隆和表达系统
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
规格
细菌或酵母菌株
DH10B
耐抗生素细菌
氨苄青霉素 (AmpR)
细胞类型
DH10B
克隆方法
平末端 PCR,限制性内切酶/MCS
产品规格
试剂盒
样品类型
PCR 产品
效率
≥ 1 x 10^9
适用于(应用)
PCR克隆
反应次数
40 次反应
产品线
Thermo Scientific™
产品类型
PCR 克隆试剂盒
数量
40 次反应
运输条件
干冰
载体
pJET1.2/blunt
内容与储存
• 20 x 用于亚克隆的 DH10B 感受态细胞 (100 µL)
• 2 x pUC19 DNA (20 µL) (100 pg/µL)
• 2 x S.O.C.培养基 (5 mL)
• pJET1.2/blunt 克隆载体 (46 µL) (50 ng/µL)
• 2X 反应缓冲液 (600 µL)
• T4 DNA 连接酶 (46 µL) (5 U/µL)
• DNA 平末端化酶 (46 µL)
• DNA 平末端化酶 (46 µL)
• pJET1.2 正向测序引物,10 µM 水溶液 (50 µL)
• pJET1.2 反向测序引物,10 µM 水溶液 (50 µL)
• 对照 PCR 产物,976 bp,3’-dA 突出端 (8 µL) (12 ng/µL)
• 不含核酸酶的水 (1.25 mL)
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