通过用驱动 β-内酰胺酶表达的 FOXO3 反应元件 (DBE-bla) 以及四环素抑制子和四环素（或四环素类似物多西环素）-诱导的 FOXO3 构建体对 HeLa 宫颈癌细胞进行慢病毒转导，对 CellSensor™ T-REx™ FOXO3 DBE-bla HeLa 细胞系进行工程改造。在这些细胞中添加多西环素可实现 FOXO3 转录因子表达和随后的 β-内酰胺酶表达，而后者又可通过胰岛素介导的 PI3K/AKT 信号转导通路激活下调，从而导致 FOXO3 的磷酸化和失活，并伴随 β-内酰胺酶表达的抑制。通过评估各种试验参数（包括细胞平板接种数量、DMSO 耐受性、刺激时间和底物上样时间），检测了该细胞系的稳健测定性能。使用胰岛素系列稀释液进行测定验证，以拮抗多西环素诱导的 FOXO3 活性（图 1）。还可提供使用 RNAi 和替代刺激物的额外检测数据。