CellSensor™ irf1-bla TF-1 细胞系

Jak/Stat 信号转导通路在细胞对不同细胞因子的反应中发挥重要作用。Jak/Stat 通路之一 Jak2/Stat5 通过对白介素-3 (IL-3)、催乳素、促红细胞生成素 (Epo) 和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 (GM-CSF) 的响应介导细胞增殖。由于红细胞生成缺陷，JAK2 基因敲除导致胚胎死亡，表明 Jak2/Stat5 通路在红细胞形成中发挥重要作用。最近在高比例的骨髓增生性疾病 (MPD) 患者中发现了 JAK2 (V617F) 激活突变，这表明 Jak2/Stat5 通路可能是某些形式的 MPD 的潜在治疗靶点。活化的 Stat5 转录因子可识别在 β-酪蛋白、干扰素调节因子-1 (irf-1) 和许多其他基因的启动子区中发现的特异性回文 DNA 序列并与其结合。CellSensor™ irf1-bla TF1 细胞系含有处于 irf-1 反应元件（稳定整合至 TF1 细胞中）控制下的 β-内酰胺酶报告基因。TF1 细胞是对 GM-CSF 具有生长依赖性的人红白血病细胞系，具有完整的 GM-CSF-JAK2-STAT5 通路使用 GM-CSF 针对 EC₅₀ 和 Z’ 因子对该细胞系进行了验证。还在可变的实验条件（包括 DMSO 浓度、细胞数量、刺激时间和底物上样时间）下检测了该细胞系。还检测了对 EPO 和 Jak 抑制剂 1 的反应性（图 2 和 3）。以 384 孔规格使用在指定浓度范围内的 GM-CSF 一式三份刺激 CellSensor™ irf1-bla TF1 细胞。将细胞与激动剂和 0.5% DMSO 孵育 5 h，然后与 LiveBLAzer™ - FRET B/G 底物 (CCF4-AM) 混合 2.5 h。使用标准荧光板读数仪获得 460 nm 和 530 nm 处的荧光发射值。对照指定 GM-CSF 浓度绘制各重复样品的 460/530 比图。以 384 孔规格使用在指定浓度范围内的 Epo 刺激 CellSensor™ irf1-bla TF1 细胞。将细胞与激动剂和 0.5% DMSO 孵育 5 h，然后与 LiveBLAzer™ - FRET B/G 底物 (CCF4-AM) 混合 2.5 h。使用标准荧光板读数仪获得 460 nm 和 530 nm 处的荧光发射值。对照指定 Epo 浓度绘制响应比图。以 384 孔规格使用在指定浓度范围内的 Jak 抑制剂 1 处理 CellSensor™ irf1-bla TF1 细胞。然后在 0.5% DMSO 中使用 GM-CSF 或 EPO 刺激细胞 5 h，然后与 LiveBLAzer™ - FRET B/G 底物 (CCF4-AM) 混合 2.5 h。使用标准荧光板读数仪获得 460 nm 和 530 nm 处的荧光发射值。将这些值转换为相对于一组对照品（未刺激细胞和 GM-CSF 或 EPO 处理细胞的 EC80）的抑制百分比，并对照指定 Jak 抑制剂 1 浓度绘图。学术和非营利性客户，请查询特价信息。