在 BLOCK-iT™ 慢病毒 RNAi 表达系统中提供的 pLenti6/BLOCK-iT™-DEST 表达载体可用于从慢病毒载体中高效引入和体内稳定表达短发夹 RNA (shRNA)。一种新型克隆方法使 ∼50-bp DNA 寡核苷酸紧接着 U6 pol III 启动子进入 BLOCK-iT™ U6 入门载体。寡核苷酸设计用于表达可形成茎环结构的 RNA，该结构包含目的靶基因的正义区和反义区。然后将该 shRNA 重组到 pLenti6/BLOCK-iT™-DEST 载体中。病毒产生和转导后，U6 启动子驱动的 shRNA 作为 RNAi 盒稳定整合。产生的 shRNA 避免了宿主防御机制，并将有效地产生 RNAi 基因敲低反应（图 1）。

pLenti6/BLOCK-iT™-DEST 载体（图 2）可提供：

•与包含 RNAi 盒的 attL-flanked U6 Gateway™ 入门载体进行有效重组的 attR 位点
•高效慢病毒包装和目标 shRNA 递送所需的所有组分
•用于快速、有效筛选表达 shRNA 的稳定细胞系的杀稻瘟菌素选择标记 利用 BLOCK-iT™ 慢病毒 RNAi 表达系统，可实现分裂和非分裂哺乳动物细胞类型和动物模型中基因阻断的长期分析。

BLOCK-iT™ RNAi U6 入门载体试剂盒允许进行 shRNA 靶序列的简化克隆以在瞬时实验中验证效果。通过标准 Gateway™ LR 重组反应，将选定的 RNAi 表达盒从 BLOCK-iT™ RNAi U6 入门载体快速有效地重组到 pLenti6/BLOCK-iT™-DEST 载体中（图 3）。