EZ-Link™ NHS-脱硫生物素

Thermo Scientific EZ-Link NHS-脱硫生物素是一种短的膜可透过性、胺反应性标记试剂，其生物素样基团可从链霉素亲和素中洗脱，使其适用于细胞内蛋白标记和纯化。

EZ-Link NHS-脱硫生物素的特点：

•脱硫生物素 –生物素类似物易于从链霉亲和素中洗脱，这是用于亲和纯化应用的理想特点
•蛋白标记–在纯化或混合样品中标记抗体或蛋白，以便在链霉素亲和素微珠的沉降检测中实现高回收率
•膜可透过性–因为较小且不带电荷的试剂可以轻易穿透细胞膜扩散，所以可对完整细胞进行细胞内标记
•胺反应性 –与伯胺 (-NH2) 反应，如赖氨酸 (K) 侧链或多肽的氨基末端

NHS-脱硫生物素是生物素的一种变体，其被活化为一种 NHS 酯，以便通过脱硫生物素基团共价标记蛋白或其他分子的伯胺 (-NH2)。脱硫生物素标签与链霉素亲和素和其他生物素结合蛋白结合，具有高特异性但容易在温和的条件下洗脱（即，方式为被常规的游离生物素竞争性置换）。因此，该试剂是用于亲和素-生物素技术的 NHS-生物素（产品编号 20217）的一种有用替代品，通过该技术会预期对标记蛋白进行非变性洗脱。这种简单且较小的胺反应性脱硫生物素试剂种类不带电荷且具有细胞膜可透过性；因此，NHS-脱硫生物素可与完整细胞一起用于细胞内蛋白标记。

脱硫生物素 vs. 生物素
脱硫生物素是一种单环且无硫的生物素类似物，与生物素相比，与链霉素亲和素结合时的特异性几乎相等，但亲和力较低（分别为 1/Kd = 10^11 vs. 10^15M）[1-2]。因此，基于与游离生物素的竞争性置换，可以使用温和的条件，从链霉素亲和素亲和树脂中很容易且具有特异性地将脱硫生物素化诱饵蛋白及其相互作用配偶体洗脱出来。对于使用生物样品进行的沉降检测实验，脱硫生物素的这种软释放特点也有助于尽可能减少内源性生物素化分子的共纯化，在洗脱靶蛋白复合物与游离生物素时这些分子仍与链霉素亲和素结合。通过经修饰的亲和素-生物素亲和系统，也无需使用可能分离复合物和/或破坏靶蛋白或细胞的苛刻洗脱条件。脱硫生物素技术是使用不表达融合标签的天然或重组蛋白或在天然条件下分离捕获蛋白的理想选择，例如靶向完整细胞或细胞表面蛋白时。

使用 NHS 酯试剂进行标记
生物素的 N-羟基磺基琥珀酰亚胺 (NHS) 酯是最常用的生物素化试剂。NHS-活化生物素在碱性缓冲液中与伯胺基团 (-NH2) 高效反应，形成稳定的酰胺键。蛋白质通常有几个可作为标记靶标的伯胺，包括赖氨酸 (K) 残基的侧链和每个多肽的 N 端。大多数 sulfo-NHS 酯具有直接水溶性，但不具有膜可透过性。原色普通 NHS 酯在水性缓冲液中的溶解性较低，但具有膜可透过性。