大肠杆菌 DNA 连接酶

大肠杆菌 DNA 连接酶可在 β-NAD 存在的条件下催化具有 3´ 羟基和 5´ 磷酸内聚末端的双链 DNA 之间形成磷酸二酯键。单链核酸不是这种酶的底物。

应用：第二链 cDNA 合成 (1)。无需平末端连接时，可选择 T4 DNA 连接酶 (2)。

来源：从含有 λ 溶素原 gt4lop-11 lig⁺ S7 的大肠杆菌 594 (Su^-) 纯化得到 (3)。

性能和质量测试：脱氧核糖核酸内切酶以及3´ 和 5´ 脱氧核糖核酸外切酶测定；经过连接效率测试。

单位定义：一个单位是指在含有 0.12 μM (300 µg/ml) 5´ 末端浓度的 20 µl 最终体积中，在 16°C 下于 30 分钟内完成 Hind III-酶切 λ DNA 50% 连接所需的酶量。

单位反应条件：18.8 mM Tris-HCl（pH 值 8.3）、90.6 mM KCl、4.6 mM MgCl₂、3.8 mM DTT、0.15 mM λ-NAD、10 mM (NH₄)₂ SO₄，共 20 µl 溶液，在 16°C 下反应 1 小时。