LightShift EMSA 检测的原理类似于 Western 印迹。生物素末端标记的双螺旋 DNA 与细胞核提取物或纯化因子一起孵育并在天然凝胶上电泳。然后快速(30 分钟)将 DNA 转印到阳性尼龙膜上,进行紫外交联,用链霉素亲和素-HRP 偶联物进行探测,并与底物一起孵育。可在一天内完成从标记到得出结果。
蛋白与 DNA 的相互作用是控制许多细胞过程的关键,包括 DNA 复制、重组和修复、转录和病毒组装。研究基因调控和确定蛋白:DNA 相互作用的核心技术是电泳迁移率实验 (EMSA)。
EMSA 技术基于以下观察结果:在进行非变性聚丙烯酰胺或琼脂糖凝胶电泳时,蛋白:DNA 复合物的迁移速度比无 DNA 分子慢。因为 DNA 迁移率会根据蛋白结合率发生偏移或速度减慢,因此,该实验也被称为凝胶偏移或凝胶延迟实验。直至 EMSA 蛋白:DNA 相互作用主要通过硝酸纤维素过滤柱结合试验进行研究。