DTNB（Ellman 试剂）（5,5-二硫代-双-(2-硝基苯甲酸)）

Thermo Scientific Pierce Ellman 试剂 (DTNB) 与巯基基团反应生成有色产物，提供了一种可靠的方法来测量溶液中的还原半胱氨酸和其他游离巯基。

Ellman 试剂（5,5'-二硫代-双-[2-硝基苯甲酸]）用于通过与含巯基基团化合物（如半胱氨酸）的标准曲线进行比较，估计样品中的巯基。或者，巯基基团可使用 TNB 的消光系数（412nm 处 14,150M-1 cm-1）进行测定。Ellman 试剂已用于巯基估算以外的应用，例如采用柱前衍生化程序的 HPLC 烷基硫醇测定和若干酶活性位点硫醇的研究。

Ellman 试剂的特点：

•巯基测定—与游离（还原）巯基基团 (—SH) 定量反应，以生成可检测的 TNB 产物
• 比色检测—有色产品支持在比色皿或微孔板中进行分光光度测量 (λmax = 412nm; ε = 14,150/M·cm)
• 成熟的分析方法—已明确表征的化学试剂可利用消光系数计算或通过与半胱氨酸标准进行比较，对肽或蛋白巯基基团进行定量测定

试剂特性
• 别名：DTNB、Ellman 试剂
• 化学名称：5,5'-二硫代-双-(2-硝基苯甲酸)
• 可与以下基团发生反应：巯基基团 (—SH)
• 化学式：C₁₄H₈N₂O₈S₂
• CAS 号：69-78-3
• 分子量：396.35
• 形态：黄色结晶粉末

DTCNB 与游离巯基基团反应生成混合二硫化物和 2-硝基-5-硫苯甲酸 (TNB)。在该反应中，DTNB 的靶标是一个游离巯基基团的偶联基 (R—S-)。因此，此反应的速率取决于多种因素：(1) 反应 pH 值、(2) 巯基的 pKa'和 (3) 空间和静电效应。TNB 是此反应生成的有色物质，可见光范围内具有高摩尔消光系数。Ellman (1959) 最初报告 TNB 的摩尔消光系数为 13,600M-1 cm-1（412 nm，pH 值 8.0）。因此，文献中经常引用这一数值。然而，后来的研究显示，在 412 nm 处 14,150M-1 cm-1 的值可以更准确地反映摩尔消光系数。TNB 的消光值不受 pH 值在 7.6 至 8.6 之间的变化的影响。然而，TNB 的消光值在其他溶剂中有所不同。