说明:Exonuclease I 在 3‘’→5’ 方向上水解单链 DNA,释放
5'-单核苷酸并使末端 5'-二核苷酸保留完好。水解为持续性过程,若 3'末端磷酸化,水解则不能继续。Exonuclease I 可用于测量与目标核酸内切酶反应的共价闭合环状单链 DNA 的内切核苷酸切割。此外,可使用 Exonuclease I 测量 DNA 解旋酶的活性。
为涉及测序或标记方法的应用制备 PCR 产物时,Exonuclease I 的可用性尤其显著。通常,PCR 产物中过多的引物和任何其他的无关单链 DNA 会干扰涉及 DNA 合成的后续酶促反应。Exonuclease I 的水解特性使 PCR 中所有单链 DNA 降解,使该产品在其他应用中更为高效。为实现 dNTP 去磷酸化而与 Shrimp Alkaline Phosphatase (PN 78390) 相结合时,彻底排除使用替代纯化方法(如柱分离、凝胶分离或磁性分离)。
使用 Exonuclease I 进行 PCR 纯化的相关信息,参见
USB ExoSAP-IT 协议。购买 ExoSAP-IT 将获得使用 Exonuclease I 和 SAP 进行 PCR 纯化的方法许可。
特性:分子量:55 kDa
热灭活:80°C,持续 15 min。
降解为末端二核苷酸。
使糖基化 DNA 降解。
最适温度:37°C
纯度:经 SDS-PAGE 测定,纯度高于 95%。已检测污染性核酸内切酶、双链核酸外切酶和核糖核酸酶。
储存缓冲液:20 mM Tris-HCI (pH 7.5)、5 mM 2-巯基乙醇、0.5 mM EDTA 和 50% 甘油。
测定条件:反应混合物 (100 μL) 包含 67 mM 甘氨酸缓冲液(pH 值 9.5)、10 mM
2-巯基乙醇、6.7 mM MgCl
2、0.5 mM 变性 DNA 和酶。孵育在 37°C 下进行,持续 30 min。
单位定义:一个单位是指催化变性 DNA 释放 10 nmoL 酸溶性核甘酸的酶量(标准条件、30 min 内、37°C 下)。
浓度:标准浓度:10 个单位/μL,PN 70073
高浓度:20 个单位/μL,PN 72073
功能分析:使用 Sequenase™ Version 2.0 DNA Polymerase 测序试剂盒 (PN 70170) 进行测序反应前,使用 Exonuclease I 处理 PCR 产物,使未掺入的引物降解。
参考文献:GOLDMARK, P. J. AND LINN, S. (1972)
J. Biol.Chem.247, 1849-1860.
ROSAMOND, J., TELANDER, K. M. AND LINN, S. (1979)
J. Biol.Chem.254, 8646-8652.
WERLE, E., SCNEIDER C., RENNER, M., VÖLKER, M. AND FIEHN, W. (1994)
Nucleic Acids Res.22, 4354-4355.
HANKE, M. AND WINK, M. (1994)
BioTechniques 17, 858-860.
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.