Exonuclease VII

Exonuclease VII 是一种严格的单链定向酶，具有 5'→3' 和 3'→5' 核酸外切酶活性，这使其成为唯一具备单链特异性的双向核酸外切酶。Exonuclease VII 对二价阳离子无明显需求，因其在 EDTA 存在时具备完全活性。初始反应产物是酸不溶性寡核苷酸，其进一步水解成酸可溶形式。限制性酶切的产物为小型低聚体（从二聚体到十二聚体）。

特性：
分子量：xseA 亚单位 = 51.8 kDa；xseB 亚单位 = 8.8 kDa
最适温度：37°C
最适 pH 值：8.0
失活：95°C，持续 10 min。

纯度：
经 SDS-PAGE 确定高于 95%。已检测污染性核酸内切酶、双链核酸外切酶和核糖核酸酶。

储存缓冲液：
50 mM Tris-HCI（pH 值 8.0）、200 mM NaCl、0.5 mM EDTA、10 mM DTT、50% 甘油。

测定条件：
反应 (50 μL) 包含 50 mM Tris-HCl（pH 值 7.9）、50 mM 磷酸钾（pH 值 7.6）、8.3 mM EDTA、10 mM 2-巯基乙醇、变性 DNA 和酶。

单位定义：
一个单位是指催化 1 nmoL 核苷酸转化为酸溶性核甘酸所需的酶量（标准测定条件、30 min 内、37°C 下）。

浓度：
10 个单位/μL

来源：
大肠杆菌菌株（包含编码 Exonuclease VII 的大型 (xseA) 和小型 (xseB) 亚单位的高产克隆）。

方案：典型反应条件 (50 μL)
70 mM Tris-HCI、pH 值 8.0
8 mM EDTA
10 mM 2-巯基乙醇
1 μg DNA
50 μg/mL
0.2 个单位 Exonuclease VII

在 37°C 下孵育 30 min。在 95°C 下加热 10 min 使酶失活。注意 Exonuclease VII 不受 EDTA 抑制。

注意：与 Exonuclease VII 配合使用的一种典型稀释缓冲液为 50 mM Tris（pH 值 7.9）、1 mM DTT 和 0.5 mg/mL 乙酰化 BSA。

应用：
  1.基因组 DNA 中内含子的映射位置。
  2.使用聚（dA-T）尾从插入片段中去除载体 DNA。
  3.去除过量 PCR 引物。
  4.去除限制性核酸内切酶产生的单链突出端。