酵母多聚腺苷酸聚合酶

多聚腺苷酸聚合酶可催化在 RNA 的 3' 末端增加腺苷残基。在第一个克隆步骤期间，它可用来将多聚腺苷酸尾添加至 RNA。该反应需要 Mn²⁺ 或 Mg²⁺，以 ATP 为底物，以及包含 3' 羟基末端的任何 RNA 作为引物。虫草素-5'-三磷酸盐 (3'-dATP) 取代 ATP 导致 RNA 末端增加单 3'-dA 残基，该技术有助于在 3' 末端标记 RNA。

在比较研究中，酵母多聚腺苷酸聚合酶在 RNA 寡核苷酸标记和多聚腺苷酸加尾方面的工作效率要高于大肠杆菌多聚腺苷酸聚合酶。酵母酶需要的孵育时间更短，并且发现它标记长短底物的效果同样好。用于长 RNA 分子的 3' 末端标记时，多聚腺苷酸聚合酶优于 T4 RNA 连接酶。

*注：多种经修饰核苷酸也可用于使用酵母多聚腺苷酸聚合酶标记 RNA 的 3' 末端。

纯度：
不含核糖核酸酶

储存缓冲液：
20 mM Tris-HCl（pH 值 8.0）、50 mM KCl、0.5 mM DTT、50% 甘油。

检测条件：
2 5 mM Tris-HCl（pH 值 7.0）、40 mM KCl、0.5 mM MnCl₂、0.05 mM EDTA、0.5 mM DTT、0.2 mg/mL BSA、10% 甘油、3.3 µM 经放射性标记的 ATP、0.5 mM ATP、6.5 µg 多聚腺苷酸（∼100 个碱基）、多聚腺苷酸聚合酶。在 37°C 下孵育 10 min 后，可测定酸不溶性放射性。

单位定义：
一单位相当于在 37°C 下添加至 (riboA)15 的 15 pmol/min AMP。

浓度：
600 个单位/µL

功能测试：
用虫草素-5'-三磷酸盐对核糖核苷酸进行 3'-末端标记。

经功能测试的 5X 多聚腺苷酸聚合酶反应缓冲液（包括 1 mL，PN 74226）：
100 mM Tris-HCl（pH 值 7.0）、3.0 mM MnCl₂、0.1 mM EDTA、1 mM DTT、500 µg/mL 乙酰化 BSA、50% 甘油。

应用：
  1. 将多聚腺苷酸尾添加至 RNA。
  2. 标记 RNA 的 3' 末端。

来源：
含有高产克隆的酵母多聚腺苷酸聚合酶的大肠杆菌菌株。