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ActivX™ 脱硫生物素 GTP 探针含有一种通过不稳定酰基-磷酸键连接到核苷酸的经修饰生物素。ActivX 活性位点富集探针在确定活性酶水平方面具有优势,通过使用类似物标记的探针,可以对非活性酶和活性酶进行分析。ActivX 探针只能选择性地富集在标记时具有功能活性和生物学意义的酶。通过选择性富集,用户可以鉴定和分析样本中的靶标酶类别,或评估酶抑制剂的特异性和亲和力。
在从酶中去除 GTP 或 GDP 核苷酸后,脱硫生物素-GTP 探针可用于共价修饰 GTPase 核苷酸结合位点中的保守赖氨酸残基。脱硫生物素-GTP 能够对样品中的靶标酶类别进行选择性富集、鉴定和谱分析。通过用与活性位点探针存在竞争作用的小分子抑制剂预孵育样本,可以测定抑制剂结合亲和力和靶标特异性。ActivX 脱硫生物素 GTP 探针可共价标记 GTPase 的活性位点以及 G 蛋白偶联受体的 GTPase 亚基。
ActivX 脱硫生物素 GTP 探针的应用:
• 广泛富集组织、细胞和亚细胞蛋白质组中的 GTP 结合蛋白
• 基于功能的酶富集
• 对数十至数百种抑制剂靶标进行分析
可以通过 Western 印迹或质谱分析 (MS) 来评估使用脱硫生物素探针完成的活性位点标记。对于 Western 印迹工作流程,对脱硫生物素标记蛋白进行富集,用于 SDS-PAGE 分析和后续使用特异性抗体的检测。对于 MS 工作流程,对脱硫生物素标记蛋白进行还原、烷基化处理并酶促酶切为肽。仅对脱硫生物素标记的活性位点肽进行富集,用于 LC-MS/MS 法分析。这两种工作流程均可用于确定抑制剂靶标结合,但只有 MS 工作流程才能鉴定全局抑制剂靶标和脱靶。
这些产品受限于限制性使用标记许可。