与我们的第一代无缝克隆和组装试剂盒一样，GeneArt™ 无缝 PLUS 克隆和组装试剂盒是全套试剂盒，可在单次30分钟或更短时间的室温反应中将由任一序列组成的1至4个 PCR 片段同时定向克隆至任一线性化载体中。然而，与先前的试剂盒相比，无缝 PLUS 的优势如下：

•提高效率：可针对大片段选择预克隆以提高克隆效率
• 较大的构建体：创建长达 40 kb 的构建体
• 多功能性：可在大多数革兰氏阴性细菌中进行复制的高容量、宽范围的接合载体

上述改善与所有 GeneArt™ 无缝克隆和组装试剂盒共享的这些主要优点相结合：

•快速容易 — 可在单个载体中同时克隆多达4个 DNA 片段（含有您选择的序列）；无需限制性酶切、连接或重组位点
• 精确高效 — 旨在使您能够以您所需的方向在您所需的位点克隆您所需的片段，并且可获得高达 90% 的正确克隆，并且不会留有额外序列
• 免费工具 — 使用我们可逐步引导您完成计划的免费网络工具，通过电脑模拟设计您的最终构建体和 DNA 寡核苷酸
• 载体灵活性 — 使用我们的线性载体或您选择的载体
• 多种应用 — 通过快速组合、添加、删除或交换 DNA 片段来简化多种合成生物学和分子生物学技术

对于超过4个 DNA 片段的克隆或最终分子大于 110 Kb 的情况，请考虑使用 GeneArt™ 高阶遗传组装系统。

简单快速的克隆创建
GeneArt™ 无缝 PLUS 克隆是一种简单的两步流程，包括体外组装以及随后转化至 One Shot™ DH10B™ T1R SA 感受态大肠杆菌的过程。该试剂盒采用专有酶/缓冲液混合物组装具有共享末端同源性的 DNA 片段，最终构建体中无额外序列或痕迹（“无缝”）。通过使用定制 DNA 寡核苷酸（通过我们的免费网络工具进行设计）进行 PCR 扩增即可轻松掺入末端同源性。

高效、灵活和精确的克隆
使用 GeneArt™ 无缝 PLUS 克隆和组装试剂盒时，影响克隆效率的主要因素是 DNA 片段大小（100 bp 至 10 Kb）、总最终分子大小 (≤ 40 Kb) 以及每个片段的质量和特异性。

不同片段数量的典型克隆效率：

•对于4个片段（各 5 Kb），>95%
• 对于 4 个片段（各 10 Kb），>90%

克隆成功与否与插入片段序列和载体类型无关，您可以设计并添加几乎所有所需的序列或序列组合至任何质粒中，前提是质粒可通过限制性内切酶消化或者 PCR 进行线性化。从反应中获得的环形克隆仅包含您的原始载体序列、插入片段和指定的同源性，无无关核苷酸插入。

电脑模拟设计支持
GeneArt™ 无缝 PLUS 克隆中的一个关键步骤是具有适当同源性和间距的片段和寡核苷酸的正确设计，以帮助确保克隆成功组装。我们提供了一种免费在线工具（用于无缝或高阶组装和突变的 GeneArt™ 设计工具）来帮助您通过电脑模拟设计实验。该工具可检查实验设计与产品规格的兼容性，设计具有末端同源性的 DNA 寡核苷酸用于进行克隆的不同元件的 PCR 扩增，并向用户展示载体的图形表示以及与 Vector NTI™ 软件兼容的 GenBank 格式的可下载注释序列。

应用
GeneArt™ 无缝 PLUS 克隆和组装试剂盒设计用于在多种分子生物学和合成生物学应用以及其他领域中进行克隆和 DNA 组装。该产品可用于创建带有可替换部分的模块化表达载体，还可用于执行在其他方面可能涉及多个步骤的多种任务。使用试剂盒构建融合蛋白；删除、替换或添加 DNA 元件，如现有载体中的限制性位点；执行多种其他需要处理基因序列的技术。