EZ-Link™ 酰肼-PEG4-脱硫生物素，No-Weigh™ 规格

Thermo Scientific EZ-Link 酰肼-PEG4-脱硫生物素是一种聚乙二醇化羰基反应性标记试剂，其生物素样基团可从链霉亲和素中洗脱，使其可用于细胞表面糖蛋白标记和纯化。

EZ-Link 酰肼-PEG4-脱硫生物素的特点：

•脱硫生物素—生物素类似物可以很容易地从链霉素亲和素中洗脱，这是亲和纯化应用的理想特点
•糖蛋白标记—在唾液酸残基处标记糖基化蛋白，以在链霉素亲和素微珠的沉降试验中实现高回收率
•细胞表面标记—标记并分离细胞表面糖蛋白；试剂不会渗透全细胞膜
•醛反应性—与通过糖基高碘酸盐氧化形成的醛发生反应
•酰肼活化—在 pH 值为 4 至 6 时在缓冲液（如醋酸钠）中进行反应
•聚乙二醇化—间隔臂含有一个亲水性 4 单元聚乙二醇 (PEG) 基团
•增强溶解度—聚乙二醇化使生物素化分子具有水溶性，有助于防止储存在溶液中的生物素化抗体的聚集

生物素的该脱硫生物素变体被活化，可标记大分子的高碘酸盐氧化碳水化合物。酰肼基团与羰基（醛和酮）偶联，例如经过 1 至 10 mM 高碘酸钠 (NaIO4) 处理后由唾液酸和糖蛋白多糖的其他糖组分产生的偶联物。脱硫生物素标签与链霉素亲和素和其他生物素结合蛋白结合，具有高特异性但容易在温和的条件下洗脱（即，方式为被常规的游离生物素竞争性置换）。因此，该试剂是用于亲和素-生物素技术的酰肼-PEG4-生物素（产品编号 21360）的一种有用替代品，通过该技术预期会对标记蛋白进行非变性洗脱。亲水性 4 单位聚乙二醇 (PEG)  间隔臂可增强溶解度并减少储存在溶液中的标记蛋白的聚集。PEG 片段还增加了间隔臂的长度和灵活性，从而尽量降低与亲和素分子结合时的空间位阻。No-Weigh 规格（5 x 1 mg 可重复密封小瓶）消除了称取少量试剂的困难，并尽可能地保护未使用试剂免于发生降解。

脱硫生物素与生物素
脱硫生物素是一种单环、无硫的生物素类似物，与链霉素亲和素结合的特异性与生物素几乎相同，但亲和力低于生物素（分别为 1/Kd = 10^11 vs. 10^15M）[1-2]。因此，基于与游离生物素的竞争性置换，可以使用温和的条件，从链霉素亲和素亲和树脂中很容易且具有特异性地将脱硫生物素化诱饵蛋白及其相互作用配偶体洗脱出来。对于使用生物样品进行的沉降检测实验，脱硫生物素的这种软释放特点也有助于尽可能减少内源性生物素化分子的共纯化，在洗脱靶蛋白复合物与游离生物素时这些分子仍与链霉素亲和素结合。通过经修饰亲和素-生物素亲和系统，也无需使用可能分离复合物和/或破坏靶蛋白或细胞的苛刻洗脱条件。脱硫生物素技术是使用不表达融合标签的天然或重组蛋白或在天然条件下分离捕获蛋白的理想选择，例如靶向完整细胞或细胞表面蛋白时。

使用酰肼试剂进行标记
酰肼和烷氧基胺是两种羰基反应性基团类型。酰肼 (–NH-NH2) 在微酸性条件下与醛基发生特异性反应，形成腙键；使用氰基硼氢化钠（产品编号 44892）可进一步将其还原为稳定仲胺键。存在苯胺（产品编号 88944）时反应更高效。或者，可以使用 EDC 碳二亚胺化学试剂将酰肼与羧酸偶联。

可使用高碘酸钠（产品编号 20504）通过糖二醇组分氧化在糖蛋白和其他多糖化合物中生成反应性醛基。唾液酸残基是蛋白糖基化的常见组分，很容易与 1 mM NaIO4 转化为醛。