质谱兼容交联剂

化学交联结合质谱分析是改善蛋白质表征和鉴别蛋白-蛋白相互作用的有效方法。该方法已应用于重组和天然蛋白复合物，最近已应用于全细胞裂解物或完整的单细胞生物，以在全球范围内鉴别蛋白-蛋白相互作用。DSPP 和 TBDSPP 的富集功能通过分离交联与非交联肽，降低了样品复杂性，改善了交联蛋白的检测。

• 三官能团交联剂：NHS 酯（两端）、间隔中的膦酸 (DSPP) 或膦酸酯 (TBDSPP)，用于富集
• 高纯度结晶试剂，用于蛋白质结构和相互作用表征
• 膜可透过性版本 (TBDSPP)，用于细胞内交联
• 可使用 Fe-NTA IMAC 或 TiO₂ MOAC 进行富集

DSPP（二琥珀酰亚胺苯基膦酸，PhoX）和 TBDSPP（叔丁基二琥珀酰亚胺苯基膦酸酯，tBu-PhoX）是磷酸富集交联剂，在 7 原子间隔臂的每个末端均含有胺反应性 N-羟基琥珀酰亚胺 (NHS) 酯，并含有一个膦酸基团 (DSPP) 或膦酸酯 (TBDSPP)，用于富集。在 pH 7–9 缓冲液中，两者均与伯胺基团 (-NH2) 高效反应，形成稳定的酰胺键。随后，磷酸或磷酸酯基团可使用固定化金属亲和色谱 (IMAC) 或金属氧化物亲和色谱 (MOAC) 富集交联肽。

在这两种可富集的 MS 交联剂中，DSPP 的水溶性高于 TBDSPP，更适用于体外交联、简单纯化的蛋白和蛋白复合物。TBDSPP 因膜透过性增加更适于细胞内交联。虽然两种交联剂均可使用传统磷酸肽方法富集，但 TBDSPP 交联肽必须首先与 TFA 一起孵育以去除叔丁基保护基。TBDSPP 磷酸基团（酸切割后）不是磷酸酶的底物，可用于在富集前去除样品中的内源性磷酸肽。

备注：要对交联肽进行高分辨率分析，推荐用于 Nanospray Flex 源的 LC 色谱柱是 Acclaim PepMap 100 C18 LC 色谱柱（货号 164940 或 164568）。对于 EASY-Spray 离子源，推荐 LC 色谱柱为 EASY-Spray C18 LC 色谱柱（货号 ES900 或 ES904）。