RecoverAll™ FFPE 总核酸分离试剂盒

RecoverAll™ FFPE 总核酸分离试剂盒用于从福尔马林或多聚福尔马林固定、石蜡包埋 (FFPE) 组织中提取总核酸。包括足够用于从多达四张 20 µm 切片或多达 35 mg 未切片的核心样品各进行40次纯化的试剂。用于 FFPE 的 RecoverAll™ 总核酸分离试剂盒的特性：

•针对从 FFPE 组织中分离总核酸（包括 microRNA）进行了优化
• 无需过夜蛋白酶 K 消化 — 早上脱蜡，下午进行 qRT-PCR
• 典型得率 > 未固定组织的 50%
• 回收的核酸适用于下一代测序、实时 RT-PCR、PCR、突变筛选和微阵列分析

从不同的样品中提取核酸
存档的组织样品包含有价值的疾病状态信息，但传统上很难将核酸从质量适用于分子分析的样品中分离出来。标准保存技术使用福尔马林，可保持组织结构并防止易腐败，但也可捕获核酸并通过蛋白质-蛋白质和蛋白质-核酸交联修饰。RNA（在一定程度上是 DNA）通常经过这种片段化和化学修饰，因此与许多分子分析技术不兼容。FFPE 组织中的 RNA 片段化无法逆转；然而，RecoverAll™ 试剂盒的蛋白酶消化条件设计用于在相对较短的时间内释放较大量（如图所示）的所有大小的捕获 RNA 片段，包括 microRNA。

RecoverAll™ 总核酸分离试剂盒溶液
RecoverAll™ 总核酸分离试剂盒操作需要约45分钟的手动操作时间，并且通常可以在不到1天的时间内完成针对 RNA 的操作。使用一系列二甲苯和乙醇洗涤液对 FFPE 样品进行脱蜡。接下来，它们要经过大量的蛋白酶酶切，孵育时间应符合 RNA 或 DNA 回收的要求。然后使用快速玻璃过滤法纯化核酸，并洗脱至水或低盐缓冲液中。

几乎用于任何下游应用的核酸
对于所有 FFPE 组织都是这样，样品固定和储存通常会导致核酸片段化和修饰。因此，下游应用（如微阵列分析，需要比 qRT-PCR 更原始的 RNA）可能需要进行修饰以获得较优结果。尽管 DNA 一般不和 RNA 一样容易进行片段化，但它与福尔马林反应更强，而且需要更长的（2天）蛋白酶消化时间来释放大量 DNA。