Click-iT™ HPG Alexa Fluor™ 594 蛋白合成检测试剂盒为使用荧光显微镜检查、高内涵成像或流式细胞分析检测新生蛋白合成提供了一种快速、灵敏、无毒和无放射性的方法。试剂盒中包括 L-高炔丙基甘氨酸(HPG,蛋氨酸的氨基酸类似物,含炔基)和 Alexa Fluor™ 594 叠氮化物。用 HPG 饲喂培养细胞,在活性蛋白合成过程中掺入蛋白中。添加 Alexa Fluor™ 594 叠氮化物会导致绿色荧光叠氮化物和炔烃之间的化学选择性连接或点击反应,从而通过基于成像的分析检测修饰蛋白。
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无放射性替代— 替代传统
35S-蛋氨酸
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可视化大分子蛋白动态— 荧光标记蛋白,使得可测定其定位,包括聚集
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特异性 — 标记和检测标签之间选择性、特异性反应
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稳定性— 产物包含一个不可逆共价键
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多通路 — 与 Click™-iT AHA(叠氮化物氨基酸和炔烃染料)配合使用以检测空间和时间差异
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适用于生物样品— 易检测、高灵敏度和低背景(无论复杂性如何)
Click-iT™ HPG Alexa Fluor™ 594 蛋白合成检测试剂盒已在 HeLa、A549 和 U-2 OS 细胞中使用多种抑制蛋白合成的试剂(包括环己酰亚胺和茴香霉素)成功进行了检测。还使用 HeLa 细胞中蛋白酶体抑制剂(MG132 和硼替佐米)和自噬阻滞剂(氯喹)证明了这些探头用于监测蛋白降解的适用性。
此外,由于 Click-iT™ HPG Alexa Fluor ™ 594 蛋白合成检测试剂盒和
Click-iT™ AHA Alexa Fluor™ 488 HCS 试剂盒之间的 Click-iT™ 化学差异,这些试剂盒可联合用于新生蛋白合成差异的空间或时间测定。