Thermo Scientific aLICator™ LIC 克隆和表达系统设计用于在
大肠杆菌中快速且高效地连接独立克隆并严格调控基因表达。pLATE 细菌表达载体设计可实现极轻微背景(未诱导)表达的同时具有高水平靶蛋白表达,允许表达对
大肠杆菌细胞有毒性的蛋白。为了简化并促进将克隆插入表达载体的过程,aLICator 系统使用定向 LIC 克隆技术(一种能够提供高克隆效率的快速程序)。
aLICator LIC 克隆和表达系统的严格调控表达和快速高效的定向克隆使其成为
大肠杆菌常规和毒性基因克隆和表达的极佳选择。
产品优势• 高效 LIC 克隆
• 严格控制基因表达
• 高得率表达
• 通用—具有标签去除选项的带标签或不带标签蛋白表达
应用• 定向 PCR 产物克隆
• 严格调控蛋白表达
• 毒性基因的表达
原则aLICator LIC 克隆系统使用定向 LIC 克隆技术简化和促进克隆至表达载体。LIC 可确保超过 95% 的高克隆效率,并且无需连接和限制性内切酶酶切步骤。
LIC 方法使用 T4 DNA 聚合酶在 pLATE 载体和 DNA 插入片段上创建特异性的 14 至 21 个核苷酸单链突出端。T4 DNA 聚合酶具有两种酶活性:5'→3' 聚合酶活性和 3'→5' 核酸外切酶活性。核酸外切酶活性可从 DNA 的 3'末端去除核苷酸,而聚合酶活性可使用 dNTP 和互补 DNA 链作为模板来恢复链。在 LIC 方案中,反应中仅包括 dGTP,使得互补链中首次出现胞嘧啶时 3'→5'-核酸外切酶和 5'→3'-聚合酶活性可平衡。退火后,无需使用 T4 DNA 连接酶即可将 LIC 载体和插入片段转化为感受态
大肠杆菌细胞。在载体-插入片段连接处形成共价键,在细胞内产生环状质粒。
特点系统由四个基于 pLATE 系列细菌表达载体的试剂盒组成:
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aLICator™ LIC 克隆和表达试剂盒 1 - pLATE11 载体,不带标签蛋白表达。
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aLICator™ LIC 克隆和表达试剂盒 2(N 端 His 标签/EK)—pLATE51 载体,N 端 His 标签蛋白表达。
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aLICator™ LIC 克隆和表达试剂盒 3(C 端 His 标签)—pLATE31 载体,C 端 His 标签蛋白表达。
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aLICator™ LIC 克隆和表达试剂盒 4(N 端 His 标签/WQ)—pLATE 52 载体,N 端 His 标签蛋白表达、WELQut 切割的选择。
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aLICator™ LIC 克隆和表达套装 1(一体式/EK)—pLATE11、pLATE51 和 pLATE31 载体,不带标签、N 或 C 端 His 标签蛋白表达的选择。
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aLICator™ LIC 克隆和表达套装 2(一体式/WQ)—pLATE11、pLATE52 和 pLATE31 载体,不带标签、N 或 C 端 His 标签蛋白表达、WELQut 切割的选择。
对于已知优先针对 N 或 C 端 6xHis 标签位置的蛋白,建议使用适当的 N 或 C 端试剂盒。当尚不清楚蛋白结构和特点时,推荐克隆到所有三种载体中,并确定较兼容载体以进行进一步研究。
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