Themo Scientific EpiJET 5-hmC 和5-mC分析试剂盒包含三种高级酶:T4 噬菌体β-葡糖基转移酶(T4 BGT)、Epi MspI 和 Epi HpaII。Epi MspI 和 Epi HpaII 是对 CCGG 位点的内部胞嘧啶甲基化具有不同敏感性的同裂酶。当胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶 (5-mC) 或5-羟甲基胞嘧啶 (5-hmC) 位于识别序列内时,Epi MspI 可完全酶切基因组 DNA,但当5-hmC 葡糖基化时,其活性被完全阻断。Epi HpaII 仅切割未修饰的 CCGG 位点。
该试剂盒利用 T4 BGT 能力,通过向5-hmC 添加葡萄糖基团,提高限制性内切酶 Epi MspI 对葡糖基化5-hmC 的敏感性,对5-hmC 残基进行特异性修饰。T4 BGT 配制后可在15分钟内完成5-hmC 的高度特异性、完整和快速葡糖基化。
分析包括使用 Epi MspI 和 Epi HpaII 进行 DNA 样品葡糖基化和后续限制性酶切。然后用qPCR对限制性消化产物进行分析,其引物对位于CCGG位点两侧。
产品优势
• 高效而可靠—5-hmC 和5-mC 的准确定量测定
• 稳健—广泛的(从 0.2 μg 至4 μg)输入 DNA
• 快速—程序在5小时内完成,无需孵育过夜。
应用
5-hmC 和5-mC 分析和 CCGG 序列的定量测定
包括
• T4 ß – 葡糖基转移酶,5 U/μL
• 10X Epi 缓冲液
• 10X UDP–葡萄糖
• Epi MspI
• Epi HpaII
• 5-hmC 对照 DNA
• 5-mC 对照 DNA
• 未修饰的对照 DNA
• 对照引物 1
• 对照引物 2
• 无核酸酶水
• 详细方案
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.