pENTR™/D-TOPO™ 克隆试剂盒利用高效的 5 分钟克隆策略（“TOPO™ 克隆”）将平末端 PCR 产物定向克隆成为进入 Gateway™ 系统或 MultiSite Gateway™ 系统的载体。平末端 PCR 产物以高于 90% 的效率定向克隆，不需连接酶、PCR 后程序或限制性内切酶。

该试剂盒包含克隆和选择关注的 PCR 扩增基因所需的一切：

• Gateway™ 系统就绪—在多个载体系统之间快速运送克隆基因
• 快速简便—仅需 3 个步骤和短短 ∼5 分钟的实操时间即可完成从 PCR 到 Gateway™ 入门克隆的过程
• 高效—通过在正确方向插入正确片段达到超过 90% 的克隆
• 成熟—十年可靠性能

pENTR™/D-TOPO™ 克隆试剂盒概述

VECTOR：	pENTR™/D-TOPO™ 载体	用于进入 Gateway 系统的定向克隆载体
克隆方法	定向 TOPO™ 克隆	通过基于拓扑异构酶 I 的 ∼5 分钟定向连接，将平末端校正聚合酶扩增 PCR 产物连接到载体
感受态细胞	两个选项	从包含高效率或快速生长感受态细胞的试剂盒中进行选择

轻松进入 Gateway™ 系统
为了进入 Gateway™ 系统，只需通过 PCR 扩增关注的基因并将产物直接添加到提供的拓扑异构酶带电荷 pENTR™/D-TOPO™ 载体，孵育 5 分钟并转换提供的感受态大肠杆菌细胞。得到的包含 Gateway™ 入门克隆的 attL 已做好高效重组的准备，有 Gateway™ 目的载体可供选择。

优化的 pENTR™/D-TOPO™ 载体
pENTR™/D-TOPO™ 载体（图 1）的 PCR 产物插入位点两侧包括 M13 和 T7 引物测序位点和 attL 重组位点。这就可以方便地对克隆进行序列验证并将它们重新组合到含有 Gateway™ 目标载体的各种 attR 中。卡那霉素抗性基因和 pUC 复制区序列用于大肠杆菌中的选择和高拷贝增殖。

简化的定向克隆
借助定向 TOPO™ 克隆技术，无需 PCR 纯化、载体制备或者其他耗费大量时间的 DNA 操作步骤。只需将 PCR 反应产物直接添加至提供的拓扑异构酶带电载体中，孵育 5 分钟，转化并获得高达 90% 的定向插入克隆。具有四个碱基序列的载体对上四个碱基突出端设计为用于 PCR 反应的正向引物，以提供针对拓扑异构酶连接反应的方向性（图 2）。

Gateway™ 重组克隆技术的性能
Gateway™ 重组克隆技术避免限制性酶介导克隆的限制因素，使您能够在仅仅一小时内轻松进入几乎所有表达系统，效率达 99% 且可逆的 Gateway™ 重组反应。由于可以在不同载体之间移动相同的 DNA 序列，无需使用限制性内切酶、连接酶、亚克隆步骤、筛选无数菌落或重新测序，这将有助于您节省时间、金钱和精力。

领先的克隆技术
在克隆方面，TOPO™ 克隆技术和 Gateway™ 重组克隆技术十年来一直是成千上万科学研究人员的可靠伙伴。快速、简单易用且高效的 TOPO™ 克隆和 Gateway™ 重组功能可实现快速克隆和后续在不同分类的 Gateway™ 表达载体之间实现基因转移。

不同试剂盒选择
pENTR™/D-TOPO™ 克隆试剂盒可与 TOP10 感受态细胞一起采购用于标准克隆，或与 Mach1™-T1R 感受态细胞一起采购用于快速生长。

仅供研究使用。不适用于动物或人类的治疗或诊断。