测序用 TOPO™ TA Cloning™ 试剂盒，含 pCR™4-TOPO™ 载体、One Shot™ TOP10 化学感受态大肠杆菌和 PureLink™ 快速质粒小提试剂盒

测序用 TOPO™ TA Cloning™ 试剂盒可提供高效、5 分钟的一步克隆策略（“TOPO™ 克隆”），用于将 Taq 聚合酶扩增 PCR 产物直接插入质粒载体中以进行测序。每个试剂盒均使用含经过特殊设计的测序引物位点（可从各反应中获得更多的插入序列和更少的载体序列）的 pCR™4-TOPO™ TA 载体。这些试剂盒具有克隆和选择包含您首选 PCR 片段的重组载体所需的所有物品。

• 获得更多序列—使用标准测序引物时可获得更多的插入序列和更少的载体序列
• 快速且简便—从 PCR 至克隆仅需 3 步，手动操作时间短至 5 分钟
• 高效—可获得高达 95% 含正确插入片段的克隆
• 久经考验—在过去十余年中性能可靠，引用次数超过 4000 次

测序用 TOPO™ TA Cloning™ 试剂盒 试剂盒概述
• 载体：pCR™4-TOPO™ TA 载体—克隆载体经过优化，可改善测序结果
• 克隆方法：TOPO™ TA Cloning —基于拓扑异构酶 I 的含 3´A 突出端（Taq 扩增）的 PCR 产物与载体的 5 分钟连接
•感受态细胞：多种选项—从包含一般、高效、噬菌体 T1 抗性或快速生长型感受态细胞的试剂盒中选择

pCR™4-TOPO™ TA 载体—针对测序进行优化
我们从 pCR™4-TOPO™ TA 载体中删除了大量的多克隆位点，以将测序引物位点与插入位点之间的距离缩短至 33 bp。这意味着测序反应具有更少的载体序列和更多的插入序列。pCR™4-TOPO™ TA 载体具有适用于 4 种常见测序引物的位点：M13 正向、M13 反向、T7 和 T3。该试剂盒包括各等份试液。

pCR™4-TOPO™ TA 克隆选择和操作
pCR™4-TOPO™ TA 载体包含氨苄青霉素和卡那霉素抗性标记物以及用于阳性选择和蓝/白斑筛选的 LacZα-ccdB 基因融合。载体的尽可能减少的化多克隆位点仍包括用于克隆 PCR 产物简化切除的旁侧 EcoRI 位点和用于在测序前生成嵌套缺失的唯一 Sse8387I 位点。’T7 和 T3 启动子也用于体外转录。

简化的基于 TOPO™ 的克隆
使用 TOPO 克隆技术，无需使用含有特异性序列的 PCR 引物、PCR 后程序、载体制备或其他耗时长的 DNA 操作步骤。™只需将 PCR 反应物直接添加至提供的拓扑异构酶带电载体中，孵育 5 分钟，并使用提供的大肠杆菌感受态细胞进行转化。

高效克隆
携带所需插入片段的克隆高达 95%，您可以筛选更少的克隆体，以帮助您节省时间和成本。该试剂盒中使用的 pCR™4-TOPO™ TA 载体含有 3´T 突出端，用于高效连接含 3´A 突出端的 Taq 扩增 PCR 产物。

克隆标准
在克隆方面，TOPO™ 克隆技术已作为一种可靠技术供成千上万的科学家使用达十余年。快速、简单易用且高效的 TOPO™ 克隆已在多种应用中应用于多种不同载体。

测序用 TOPO™ TA 克隆™试剂盒：试剂盒选项
根据您的需求，测序用 TOPO™ TA 克隆™ 试剂盒可与提供不同优势的多种感受态细胞一起购买：

• 一般克隆：TOP10（货号 K4575-J10、K4575-01、K4575-40）
• 高效克隆：TOP10 Electrocomp™ 细胞（货号K4580-01、K4580-40）
• 一般克隆，噬菌体 T1 抗性：DH5α-T1R（货号 K4595-01、K4595-40）
• 快速生长：Mach1™-T1R 化学感受态大肠杆菌（货号 K4530-20）

我们还提供另一个版本的试剂盒，包括 PureLink™ 快速质粒小提试剂盒（货号 K4575-02）用于分离清洁、已完成测序的重组质粒。

TOPO™ 产品仅供研究使用。不得用于人或动物的治疗或诊断。

相关链接
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• 质粒 DNA 纯化试剂盒选择指南
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