除了原始 pcDNA™5/FRT 载体之外，可额外提供四个 Flp-In™ 表达载体—pcDNA5/FRT/V5-His-TOPO™、pSecTag/FRT/V5-His-TOPO™、pEF5/FRT/V5-DEST™ 和 pEF5/FRT/V5-D-TOPO™（图1）—在 Flp-In™ 系统中进行克隆和表达。这些载体提供了多种克隆选项和不同的启动子类型。载体包括以下特性：

•Flp 重组酶靶标 (FRT) 位点可有效整合至 Flp-In™ 细胞系
• 潮霉素抗性基因便于选择整合剂
• C 端 V5 标记采用抗 V5 抗体轻松检测融合蛋白
• 6xHis 标记（仅限 pcDNA5/FRT/V5-His-TOPO™ 和 pSecTag/FRT/V5-His-TOPO™ 载体）可快速纯化镍螯合树脂上的融合蛋白

所有载体均具有高水平 CMV 或 EF-1α 启动子。此外，pSecTag/FRT/V5-His-TOPO™ 包含用于重组蛋白分泌的 Igκ leader 序列。

入门选项
pcDNA™5/FRT 适用于限制性酶切介导的克隆。其他四种 Flp-In™ 表达载体提供了两种可克隆到 Flp-In™ 表达载体中的省时选择方案：
•五分钟 TOPO™ 克隆

pcDNA™5/FRT/V5-His 和 pSecTag/FRT/V5-His TOPO™ TA 表达试剂盒可在五分钟内将经 Taq 扩增的 PCR 产物直接克隆到 Flp-In™ 表达载体中。pEF5/FRT/V5 定向 TOPO™ 表达试剂盒可在五分钟内对通过校正读码酶生成的 PCR 产物实现定向克隆。使用定向 TOPO™ 克隆，使 >90% 克隆的表达方向正确，减少了菌落筛选所花费的时间。
•轻松重组到 Gateway™ 载体中

pEF5/FRT/V5-DEST™ 载体与 Gateway™ 技术*兼容，可轻松将感兴趣基因转移到不同载体或宿主系统中。快速且高效的 Gateway™ 重组反应可采用多种目的载体同时进行，在使用不同系统时可以节省时间。

启动子选择
Flp-In™ 表达载体可与 CMV 或 EF-1α 启动子一起购买。pEF5/FRT/V5-DEST™ 和 pEF5/FRT/V5-D-TOPO™ 载体包含人 EF-1É 启动子，用于驱动感兴趣基因的表达。EF-1α 启动子可在各种哺乳动物细胞类型中表达，包括 CMV 启动子表达缺失或不一致的细胞。该启动子可能更适合于一些细胞类型的长期基因表达，建议用于 BHK 和 3T3 预制 Flp-In™ 细胞系的表达。pcDNA5/FRT/V5-His-TOPO™ 和 pSecTag/FRT/V5-His-TOPO™ 载体携带 CMV 启动子，能在大多数细胞类型中实现对感兴趣基因的高水平组成型表达。