细胞治疗用NK培养基、仪器和试剂

自然杀伤 (NK) 细胞是杀死病毒感染细胞或恶性细胞的一类先天淋巴细胞。与 T 细胞不同，NK细胞以不依赖抗原的方式发挥作用，对任何它们认为是非自身的东西做出"反应"，包括恶性细胞。NK细胞是一种高潜力的同种异体免疫调节剂，因为它们具有较高安全性，并且不会引起移植物抗宿主病，移植物抗宿主病是与CAR-T细胞免疫疗法相关的风险。这使得NK细胞成为开发“现货型免疫疗法”的高潜力细胞(Front Immunol 13:1869 (2018)）。

临床前和临床研究已经证明了异体NK细胞对各种恶性肿瘤的安全性和有效性，包括血液肿瘤和实体肿瘤，而不需要严格的人类白细胞抗原HLA匹配。目前正在进行的多项临床试验均使用NK或CAR-NK细胞开发现货型同种异体疗法。但是，为了有效地浸润实体瘤，研究和临场应用中需要很多NK细胞。为了使同种异体疗法获得足够数量的细胞，肿瘤免疫疗法需要一种有效的细胞培养放大方案或工艺。

赛默飞世尔科技公司在细胞治疗工作流程中开发了Gibco细胞治疗系统 (Cell Therapy Systems，CTS)系列产品，以促进从发现到商业生产的无缝过渡。CTS 试剂的生产符合医疗器械的 GMP 规范、《联邦法规》第 21 章第 820 部分，并遵循《美国药典》第<1043>条和欧洲药典第 《5.2.12》条的有关规定 这些试剂均已实现商业规模生产，经严格检验，具有可追溯性，同时还有监管文件，帮助您放心地将细胞治疗研究过渡到临床。

人外周血单核细胞是许多免疫细胞类型的丰富来源，包括NK细胞。通常，通过密度梯度分离法从全外周血或白细胞分离制剂中分离出外周血单核细胞，但该方法需要手动操作，耗时长，且容易出错或造成污染。

令人兴奋的是，Gibco CTS Rotea逆流离心系统为PBMC分离提供了一个封闭的半自动解决方案。

NK细胞可以通过使用免疫磁珠从纯化的PBMC制剂中分离出来，如 Invitrogen Dynabeads 非接触式人NK细胞试剂盒。

无饲养层NK细胞扩增系统因其降低了安全风险而成为临床应用的理想选择。但是，无饲养层培养系统具有扩增速率低的特点，对临床应用提出了挑战，这也是基于饲养层的扩增系统目前被频繁使用的关键原因，尽管它们带来了安全和监管风险。

CTS NK-Xpander 培养基有两种包装形式：5 L袋装和500 mL 瓶装。

Gibco CTS NK-Xpander培养基， 可在不使用饲养层细胞的条件下，快速扩增高质量的功能性人NK细胞，以满足临床转化需求。

• 同类产品中性能最佳—能够在无饲养层细胞的情况下扩增高产量的人NK细胞；细胞维持 CD56+ 和 CD16+ 的表达，并表现出高效的细胞毒杀能力
• 降低相关的监管风险—旨在帮助满足细胞和基因治疗生产中使用的辅助材料的监管合规性要求；AOF生产（建议添加人 AB 血清以获得最佳效果）；提供药物主文件、原产地证书、分析证书和安全数据表
• 提供与封闭系统兼容的包装规格—提供 500 mL 瓶装和 5 L 袋装套装形式，便于工艺开发和封闭系统生产扩大

Serum-free Expansion of NK Cells with K562- Based Feeder Systems for Clinical Applications

In this webinar, Dr. Dean Lee of Nationwide Children’s Hospital discusses his work with NK cells, including optimization of culture conditions.

NK细胞经过基因改造，以提高NK细胞的功能、持久性和向肿瘤部位的转移靶向。慢病毒载体可用于基因修饰，如插入嵌合抗原受体。Gibco CTS LV-MAX慢病毒生产系统提供了一个可扩展、高产量的悬浮慢病毒载体生产平台。该平台基于HEK 293衍生病毒生产细胞，该细胞在化学成分确定的、无血清和无蛋白质的CTS LV-MAX生产培养基驯化得到。

CTS LV-MAX慢病毒生产系统提供：

• 高滴度—大于1×10⁸TU/mL（未浓缩的LVVs-GFP）
• 可扩展的悬浮系统—从 96 孔板到 2 L 生物反应器
• 无血清——减少动物源成分和相关风险
• 易操作且强大的培养和转染方案—适合当前的瞬时生产工作流程

NK细胞治疗所需要的培养体积通常可以达到10-20 L的最终体积，在最终产品配制之前，必须将其浓缩并进行缓冲液交换。Gibco CTS Rotea逆流离心系统是传统手动方案的替代选择，是一种封闭式、半自动细胞处理系统，在细胞治疗开发和制造方面具有出色的灵活性，能够实现从研究到商业制造规模化。

传统方法中，NK细胞通过流式细胞术判定其细胞表面是表达CD56+CD3-。除了CD56，NK细胞还可以通过其它细胞表面标记物（包括CD16和KIR受体家族）被进一步表征为多种亚群。查看我们可用于NK细胞分析的工具，包括流式细胞术、功能分析和免疫分析，如需更多表征信息，请访问我们的NK细胞概述页。

对于更先进的细胞分析方案，Attune CytPix 流式细胞仪高灵敏度和高通量的声聚焦流体和高速摄像机。

NK细胞疗法中的细胞通常需要冷冻保存，以确保细胞产物得到保存，而不会损害其活力和功效。Thermo Scientific CryoMed 温控冷冻机(CRF) 提供精确、可重复的冷冻结果，保护珍贵样品免受细胞内冷冻，并配备增强的数据可追溯性功能，以满足审核要求，并提供可定制的冷冻配置文件，同时支持21 CFR第11部分和GMP需求。

• 手册：细胞和基因治疗
  
• 人NK细胞的扩增和表征
  
• 扩增NK细胞的封闭、自动洗涤和浓缩
  

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