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我们可提供种种类最丰富的市售核酸染色剂,其中许多是在我们的研究实验室开发的。本节讨论下列各种染料的物理特性。以下部分描述了这些核酸染色剂在基因组学研究中的应用。
四类 Invitrogen™ Molecular Probes™ 花青染料包括:
这三类经典核酸染色剂 (经典核酸染色剂的物理特性 - 表 8.4) 包括:
图 8.1.1 示意图显示了染料 (及其他配体) 与 DNA 的不同结合模式。
Molecular Probes 核酸结合花青染料具有多种重要的光谱和物理特性:
- 高摩尔吸收率,可见波长下消光系数通常大于 50000 cm-1M-1
- 固有荧光极低,未与核酸结合时,量子产率通常低于 0.01
- 与核酸结合后,荧光增强 (通常超过 1000 倍) ,量子产率增加高至 0.9
- 对核酸具有中等至非常高的亲和力,对其他生物聚合物的染色很少或没有
它们的荧光吸收和发射光谱跨越从蓝色到近红外的可见光光谱 (图 8.1.2),在紫外线中有额外的吸收峰,使它们与多种不同类型的仪器兼容。花青染料还在一些物理特性方面表现出了重要差异 - 特别是细胞膜通透性和核酸特异性 - 从而可将其分布成不同的类别,而以下章节将详细讨论这些类别。
有几种花青染料可提供特异性核酸测定方法 (分子生物学用专用核酸试剂 - 表 8.1) 具有超高灵敏度。对于这些染料,我们开发了详细且经过广泛测试的方案,在这些测定中促进可重现的高灵敏度结果。
- Invitrogen™ 产品系列,如 PicoGreen™、OliGreen™ 和 RiboGreen™ 定量试剂及其在 溶液中核酸定量 - 第 8.3 节 的 Quant-iT™ 试剂对应物,为检测和定量溶液中的 DNA、寡核苷酸和 RNA 设定了基准。这些试剂提供了非常简单、快速的方案以及可跨越多达四个数量级核酸浓度的线性范围。
- Applied Biosystems™ 产品系列,如 凝胶、印迹和阵列核酸检测 - 第 8.4 节 中的 SYBR™ Gold、SYBR™ Green I 和 SYBR™ Green II 核酸凝胶染色剂,均为超灵敏凝胶染色剂,在核酸检测方面其灵敏度超过溴化乙锭一个数量级以上。
- Applied Biosystems™ SYBR™ Safe DNA 凝胶染色剂 (凝胶、印迹和阵列核酸检测 - 第 8.4 节),不仅致诱变性与溴化乙锭相比显著降低,而且 SYBR Safe 染色剂的检测灵敏度与溴化乙锭相当。当由获得许可的独立检测实验室进行检测时,SYBR Safe 染色剂表现出没有或极低的致突变活性,并且根据美国联邦法规不属于有害废物。
- Invitrogen™ Molecular Probes™ CyQUANT™ GR 染料 (C7026) 是一种花青染料,已在 细胞计数、细胞增殖和细胞周期试验 - 第 15.4 节中讨论过,设计用于定量细胞增殖,能够可靠检测少至 50 个细胞中的核酸。
非细胞膜通透性花青核酸染色剂 - 表 8.2中列出的花青二聚体染料 - 有时被称为 TOTO 染料系列 - 是花青染料的对称二聚体,对核酸具有出色的灵敏度。这种灵敏度是由于对核酸具有高亲和力,结合后荧光增强和量子得率较高。下文叙述了这些染料的独特物理特性和一些示例性应用;本章的稍后部分将讨论具体应用。
每种花青二聚体染料均可单独购买。对于设计新应用的研究人员,核酸染色剂二聚体采样试剂盒 (N7565) 可提供八种不同光谱的二聚体花青染料样品供检测用, (非细胞膜通透性花青核酸染色剂 - 表 8.2)。
适当设计的核酸结合染料的二聚体具有核酸结合亲和力,比其亲本单体染料的亲和力大多个数量级。 例如,据报告溴化乙锭和乙锭同源二聚体-1 (E1169)的固有 DNA 结合亲和力常数分别为 1.5 × 105 和 2 × 108 M-1,其中 Na+为 0.2 M。 因此,二聚体花青染料是可供核酸染色之用的最高亲和性荧光探针之一。
例如,在 TOTO-二聚体花青染料 (T3600) 中,TO-PRO-1 单体花青染料 (T3602) 的带正电荷侧链共价连接形成 TOTO-分子,带有四个正电荷。该键使 TOTO-染料对核酸的亲和力极大增强 - 比 TO-PRO-1 单体的亲和力高 100 倍以上。TOTO-染料对双链 DNA (dsDNA) 的亲和力甚至高于乙锭同源二聚体,单链 DNA (ssDNA) 和 RNA 也均可与之结合。TOTO-1-核酸复合物的卓越稳定性 使得染料-DNA 缔合可在电泳期间保持稳定 () ;因此,可使用纳摩尔染料浓度对样品染色,,然后再 电泳, 从而减少了处理大量溴化乙锭染色溶液固有的危险。 相反,噻唑橙 - TOTO-1 和 TO-PRO-1 的亲本化合物 - 的结合快速可逆,限制染料的灵敏度并使其核酸复合物对电泳不稳定。
除了具有卓越的结合特性外,TOTO-1 染料和其他花青二聚体在无核酸的情况下基本不发荧光,在与 DNA 结合后显示出荧光增强 100-1000 倍, 与硫唑橙在与 DNA 结合后荧光增强 (约 3000 倍) 相当。此外,花青二聚体与 DNA 结合后,荧光量子产率较高 (通常在 0.2 至 0.6 之间) ,其消光系数比乙锭同源二聚体高一个数量级。 这种灵敏度足以通过光学成像 () 和流式细胞分析检测单个已标记的核酸分子,也足以通过荧光显微镜检查追踪微生物群落和水生系统中经染料标记的病毒颗粒。 尽管有报道称将这些染料用于染色经 5% DMSO 渗透的网织红细胞,但它们通常被视为非细胞通透性。
这些染料具有不同光谱特性 (非细胞膜通透性花青核酸染色剂 - 表 8.2),只需改变连接花青核酸单体的芳香环和碳原子数量,我们即可合成它们的更多系列。化学修饰可显著改善吸收和发射光谱,并减少了结合染料的量子产率,但几乎没有改变它们对 DNA 的高亲和力。这些染料的名称反映了它们的基本结构和光谱特性。例如, YOYO-1 碘化物 (491/509) 含有一个碳原子连接氧杂花青染料的芳香环,在与 dsDNA 结合时显示最大吸收/发射波长为 491/509 nm。Invitrogen™ Molecular Probes™ 产品系列,例如仅在桥接碳原子数量上与 YOYOO™-1 染料不同的 YOYO™-3 染料 (612/631) ,与 dsDNA 结合时的最大吸收/发射波长为 612/631 nm。 Invitrogen™ Molecular Probes™ 产品系列 (如 POPO™、BOBO™、YOYO™、TOTO™、JOJO™ 和 LOLO™ 染料 ) 与 dsDNA 结合时的荧光光谱如 图 8.1.2所示。在染料:碱基比率值小于 1:1 时,对于对应的染料-ssDNA 复合物和染料-RNA 复合物而言,这些染料的光谱基本相同。然而,在染料:碱基比率值较高时,TOTO 系列和 TO-PRO 系列所有单甲氧胺 ("-1") 染料的 ssDNA 和 RNA 复合物均具有红移发射,而三甲川 ("-3") 类似物的相应复合物则不具有。 因此,花青二聚体系列染料具有广泛光谱特性,可匹配几乎任何可用激发源的输出。
图 8.1.2 DNA 结合花青二聚体的标准化荧光发射光谱,由侧栏的颜色键识别。
花青二聚体结合模式研究重点关注 YOYO-1 和 TOTO-1 染料。发现 YOYO-1 染料至少表现出两种不同的结合模式。在染料:碱基对比低时,结合模式似乎主要包括双嵌入 (图 8.1.1)。每个单体单元嵌入在碱基之间,苯唑啉环系统夹在嘧啶之间,而喹啉环夹在嘌呤环之间,从而导致螺旋松解。据二维核磁共振波谱观察,YOYO-1 双嵌入引起局部DNA结构畸变。在染料:碱基对比高时,第二种特征不太明显的外部结合模式开始发挥作用。 圆二色光谱测量也表明,YOYO-1 染料与 ssDNA 和 dsDNA 的结合模式可能存在差异。这些数据与我们自己的结果一致,包括据观察:在与单链核酸结合后在染料:碱基比高时,YOYO-1 染料与核酸复合物的荧光发射变为更长的波长;YOYO-1 染料与 DNA 结合的盐、乙醇和十二烷基硫酸钠 (SDS) 灵敏度是染料:碱基对比的函数。
TOTO-1 染料也能够双嵌入, 但据报告其与 dsDNA 和 ssDNA 发生相互作用,亲和力同样高。 TOTO-1 染料与双链八聚体相互作用的 NMR 研究表明, TOTO-1 染料是一种双嵌入剂,荧光基团嵌入在碱基和连接区之间,连接区域在小沟 内发生相互作用 (图 8.1.3)。 染料的结合会使 DNA 部分解旋,使螺旋扭曲和延长。 然而,另一项研究使用荧光偏振测量,发现外部结合模式可能更重要,其中染料分子的偶极与 DNA 沟对齐。 据报告, TOTO-1 染料对位点 5'-CTAG-3' 表现出某些序列选择性,尽管它可与 dsDNA 中的几乎任何序列结合。 TOTO-1 染料不会表现出与 DNA 的协同结合,表明它这种染料可能适合检测凝胶中的核酸。
TOTO 染料系列其他成员的结合模式也已部分表征。电泳和荧光寿命测量结果显示,YOYO-3 染料似乎也示嵌入 DNA 中。 我们在应用开发过程中确定,就对核酸的染色而言,BOBO-1 和 POPO-1 染料比 YOYO-1 或 TOTO-1 染料快得多,前者在数分钟内发生,后者在相同实验条件下达到平衡需要数小时, 表明它们的结合机制可能存在差异。荧光产量和寿命测量已经用于评估这些种类繁多的染料的碱基选择性。 圆二色光谱测量显示,双嵌入是 POPO-1 染料的主要结合模式。
图 8.1.3 与 DNA 结合的 TOTO-1 染料 (T3600) 的 NMR 溶液结构;图像来源于已提交给蛋白质数据库 (PDB 108D ) 的数据。NMR 结构显示,TOTO-1 通过双嵌入与 DNA 结合。 |
所有 TOTO 系列染料 (非细胞膜通透性花青核酸染色剂 - 表 8.2) 的供货形式均为 1 mM 二甲基亚砜 (DMSO) 溶液,但 POPO-3 (P3584) 除外,其供货形式是 1 mM 二甲基甲酰胺 (DMF) 溶液。这些阳离子染料似乎很容易从水性溶液中吸附至表面 (特别是玻璃) ,但在与核酸形成复合物后非常稳定。
我们的 TO-PRO 系列染料均列于 细胞膜非通透性花青核酸染色剂 - 表 8.2,每种染料均包含一种阳离子侧链和一种单一的花青染料。TO-PRO 系列中的单体染料在光谱上类似于相应的二聚体花青染料;然而,TO-PRO 染料只有两个正电荷和一个嵌入基,对核酸表现出的亲和力与 TOTO 系列染料相比有所降低。这些单体花青染料与其二聚体对应物一样,通常为非细胞通透性, 但已证明 YO-PRO-1 (Y3603) 染料可渗透到凋亡细胞中,从而提供一种便捷的细胞凋亡指标 (细胞凋亡检测 - 第 15.5 节)。另据观察,YO-PRO-1 可穿过活细胞的 P2X7 受体通道。
TO-PRO 系列染料保留了所有二聚体花青染料的卓越光谱特性。这些单体花青染料的吸收和发射光谱涵盖可见和近红外光谱 (非细胞膜通透性花青核酸染色剂 - 表 8.2)。它们还具有相对较窄的发射带宽,因此可促进成像和流式细胞分析中的多色应用。氩离子激光的 488 nm 和 514 nm 光谱线分别最佳激发 YO-PRO-1 (491/509) 和 TO-PRO-1 (515/531) 染料。在流式细胞术分析中,TO-PRO-3 (642/661) 的核酸复合物由红色氦-氖激光 直接激发,还可由利用共结合碘化丙啶荧光共振能量转移 (FRET) 的氩离子激光间接激发 (荧光共振能量转移 (FRET) - 注 1.2)。此外,某款流式细胞仪也检测到过 TO-PRO-3 核酸复合物;这款细胞仪配备经济实惠的 3 mW 可见波长二极管激光器,可提供 635 nm 激发。 虽然 DNA 诱导的 TO-PRO-5 染料 (T7596) 荧光增强没有像对我们其他花青染料的观察那样大,但其光谱特性 (最大激发/发射波长约为 745/770 nm) 是多色应用的独特替代方法。
TO-PRO 系列染料与 dsDNA 的结合亲和力低于 TOTO 系列染料的 dsDNA 结合亲和力,但仍非常高,解离常数可达微摩级。 TO-PRO 染料还与 RNA 和 ssDNA 结合,但通常荧光量子得率较低。荧光偏振研究表明,TO-PRO-1 和 PO-PRO-1 染料通过嵌入而结合,解旋角度分别为 2° 和 31°。 这些染料与 dsDNA 的结合没有序列选择性。 TO-PRO 系列的所有染料 (非细胞膜通透性花青核酸染色剂 - 表 8.2) 均以 1 mM DMSO 溶液形式提供。
我们的 Invitrogen™ Molecular Probes™ SYTOX™ 核酸染色剂 (非细胞膜通透性花青核酸染色剂 - 表 8.2) 是一种非细胞通透性花青染料,尤其可用作死细胞染色剂。 SYTOX Green 核酸染色剂 (S7020, S34860)是一种高亲和力的核酸染色剂,可轻易渗透细胞膜受损的细胞,但不会穿过活细胞的细胞膜。尤其适用于对革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌进行染色,该染色需要极明亮的信号。用 SYTOX Green 染色剂短暂孵育后,当使用氩离子激光的 488 nm 光谱线或任何其他 450–500 nm 光源激发时,死细胞会发出亮绿色荧光。由于所有 SYTOX 染料在水性介质中基本不发荧光,因此无需洗涤步骤。与 DAPI 或 Hoechst 染料不同,SYTOX Green 核酸染色剂的碱基选择性很小。这些特性及其 约1000 倍荧光增强 (核酸结合后) 和高量子产率,使我们的 SYTOX Green 染色剂成为一种死细胞单步简单定量指示剂,可与落射荧光和共聚焦激光扫描显微镜、荧光计、荧光微孔板读数仪和流式细胞仪配合使用 (图 8.1.4)。
SYTOX Green 核酸染色剂可与蓝色和红色荧光标记一起用于多参数分析 ()。也可以将 SYTOX Green 核酸染色剂与 SYTO 17 红色荧光核酸染色剂 (S7579) 结合,用于死细胞和活细胞进行双色可视化。由于 SYTOX Green 核酸染色剂是染色体标记以及固定细胞和组织的出色 DNA 复染剂 (),我们将其纳入 SelectFX 核标记试剂盒 (S33025),细胞核探针 - 第 12.5 节已讨论了这一点。
图 8.1.4 使用 SYTOX Green 核酸染色剂 (S7020) 对 大肠杆菌 活力进行定量流式细胞术分析。有种细菌悬液含有等数量活的和异丙醇灭活的 大肠杆菌,使用 SYTOX Green 对其进行染色,并使用激发波长 488 nm 进行分析。前向光散射与对数荧光强度的双变量频率分布 (用 510 nm长通滤光片收集) 显示了两个明显不同的群体当以不同比例混合活细菌和死细菌时,在样本中细胞群数量和活细胞实际百分比之间获得了一种线性关系 (见插图)。
Invitrogen™ Molecular Probes™ SYTOX™ Blue 染色剂 (S11348, S34857) 是一种高亲和力核酸染色剂,通常只能穿透质膜受损的细胞 ()。SYTOX Blue 染色剂可标记 DNA 和 RNA,荧光极其明亮,中心在 470 nm 附近。核酸结合 SYTOX Blue 染色剂 (约 445 nm) 的最大吸收,使得汞弧光灯的 436 nm 光谱线能够进行有效的荧光激发。与许多蓝色荧光染料不同, SYTOX Blue 染色剂也可由钨卤素灯和其他光源高效激发,这些光源在光谱紫外部分的发射光谱相对较差。SYTOX Blue 染色剂的亮度可让荧光计、酶标仪、配备旋转灯的流式细胞仪和落射荧光显微镜进行高灵敏度检测,包括未配备紫外光通道光学元件的显微镜。
在与 SYTOX Green 染色剂的并行比较中,SYTOX Blue 染色剂在定量膜受损的细菌细胞时产生的结果相同。此外,与 SYTOX Green 染色剂一样,SYTOX Blue 染色剂不会干扰细菌细胞生长。由于其发射光谱有些重叠,我们发现 SYTOX Blue 染色剂和 Green 荧光染料一起使用不适合;然而,SYTOX Blue 染色剂的荧光发射可与橙色或红色荧光探针明显区分,有助于开发信号间光谱重叠极小的多色测定。
Invitrogen™ Molecular Probes™ SYTOX™ 橙色核酸染色剂 (S11368, S34861) 旨在明确区分死亡与活的细菌、酵母或哺乳动物。与碘化丙啶相比,SYTOX Orange 染色剂的发射波长更短,其光谱更能与罗丹明滤光片组紧密匹配。此外,SYTOX Orange 染色剂的摩尔吸收率 (消光系数) 远高于碘化丙啶,结合 DNA 后荧光增强大得更多,这表明其作为死细胞染色剂或细胞核复染剂具有更高的灵敏度。SYTOX Orange 染色剂在使用 Nd:YAG 激发源时通过单分子流式细胞分析测定 DNA 片段大小非常有用,且与 dsDNA 结合后增强了 450 倍。
SYTO 染料是亲和力有点低的核酸染色剂,可被动扩散穿过大多数细胞的膜。这些紫外或可见光可激发染料可用于对活的和死亡的真核细胞以及革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌中的 RNA 和 DNA 进行染色。我们合成了大量 SYTO 染料 (细胞通透性花青核酸染色剂 - 表 8.3),具有多种重要特性:
- 对几乎所有细胞膜具有渗透性,包括哺乳动物细胞和细菌 (细胞活力、增殖和功能检测 - 第 15 章)
- 高摩尔吸收率,在可见光最大 吸收波长下消光系数大于 50000 cm-1M-1
- 固有荧光极低,不与核酸结合时,量子得率通常低于 0.01
- 与核酸结合时,量子得率通常高于 0.4
这些新型 SYTO 染色剂有蓝色、绿色、橙色或红色荧光染料可供选择,为研究人员提供了可见光可激发的染料,用于标记活细胞中的 DNA 和 RNA ()。SYTO 染料彼此有一个或多个不同的特性,包括细胞通透性、荧光增强 (结合核酸后)、激发和发射光谱 (细胞通透性花青核酸染色剂 - 表 8.3)、DNA/RNA 选择性和结合亲和力。SYTO 染料与多种荧光型仪器兼容,无论是这些仪器使用的是激光激发还是传统宽带照明源 (如汞和氙弧灯)。
SYTO 染料可对 DNA 和 RNA 进行染色。在大多数情况下,就 DNA 或 RNA 结合溶液测量而言,荧光波长和发射强度均相似。例外情况包括 SYTO 12 和 SYTO 14 染料,它们与 RNA 形成复合物时的荧光强度约为与 DNA 形成复合物时荧光的两倍,而 SYTO 16,DNA 的荧光强度约为 RNA 的两倍。因此,这些 SYTO 染料并非仅作为活细胞中的核染色剂,在这方面不应与 DNA 选择性化合物 (如 DAPI 或 Hoechst 33258 和 Hoechst 33342 染料) 相等,这些化合物在大多数细胞中都很容易对细胞核进行低浓度染色。SYTO 染料染色的真核细胞通常会显示弥漫性细胞质染色及细胞核染色。SYTO 14 染料 (S7576) 已用于可视化活细胞多核糖体复合物中内源性 RNA 的易位。 经常观察到核内体染色特别强烈。由于这些染料通常具有细胞通透性,并且大多数 SYTO 染料在中性 pH 时都含有净正电荷,因此也可能对线粒体进行染色。此外,SYTO 染料可对大多数革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌细胞进行染色。死酵母细胞可使用 SYTO 染料进行明亮的染色,活酵母细胞通常表现出线粒体和细胞核的染色。据报告,一些 SYTO 染料可用于检测细胞凋亡 (细胞凋亡测定 - 第 15.5 节) ,并且有些染料在结构上与 SYTO 染料相似,已用于检测多重耐药细胞 (细胞粘附、趋化性、多药耐药性和谷胱甘肽用探针 - 第 15.5 节)。 当与绿色荧光抗体、凝集素或非细胞通透性 SYTOX Green 核酸染色剂结合使用时,红色荧光 SYTO 染料被证明可用作复染剂 (细胞核探针 - 第 12.5 节)。
所有 SYTO 染料均可单独购买 (细胞通透性花青核酸染料 - 表 8.3),而且多种 SYTO 染料已纳入我们的 LIVE/DEAD 细胞活力检测试剂盒 (适用于各种细胞类型的细胞活力和细胞毒性检测试剂盒 - 第 15.3 节、适用于细胞活力、细胞计数和细菌革兰氏染色的 Molecular Probes 检测试剂盒 - 表 15.2)。绿色荧光 SYBR 14 染料是我们 LIVE/DEAD 精子活力检测试剂盒 (L7011、细胞活力和细胞毒性检测试剂盒 - 第 15.3 节) 的组分,也包含在 SYTO 染料系列中。为方便在新应用中检测 SYTO 染料,我们提供了多种采样器试剂盒,每种颜色组合板均含样品量的 SYTO 染料 (细胞通透性花青核酸染色剂 - 表 8.3)。为细胞染色所推荐的染料浓度取决于检测分析,可能存在很大差异,但细菌通常为 1–20 µM,酵母为 1–100 µM,其他真核生物为 10 nM–5 µM。
Invitrogen™ Molecular Probes™ SYTO™ RNASelect 绿色荧光细胞染色剂 (S32703、活力和细胞毒性检测试剂 - 第 15.2 节) 是一种可对 RNA 进行选择性染色的细胞通透性核酸染色剂 (图 8.1.5、图 8.1.6)。尽管在不结合核酸的情况下,SYTO RNASelect 染色剂几乎不发荧光,与 RNA 结合后会发出明亮的绿色荧光 (最大吸收/发射波长为 490/530 nm),但与 DNA 结合后会仅发出微弱的荧光信号 (图 8.1.5)。适用于荧光素标记细胞成像 (FITC) 的滤光片组同样适合对 SYTO RNASelect 染色剂染色的细胞成像 ()。
图 8.1.6 用 RNase、DNase 或两者处理然后用 SYTO RNASelect Green 细胞染料 (S32703) 标记的甲醇固定牛肺动脉内皮细胞。使用 RNase 去除 RNA 可防止核仁标记,且可大大减少细胞核和细胞质标记。使用 DNase 后,这些细胞区室的标记强度损失较少,反映了这种染料的 RNA 选择性性质。
SYBR 101 染料 (S21500) 的胺反应性琥珀酰亚胺酯可与具有伯胺基团的肽、蛋白、药物、聚合物基质和生物分子偶联。据期这些偶联物基本上不发荧光,直至它们与核酸形成复合物,从而发出强烈的绿色荧光。因此,它们可能有助于研究核酸与各种生物分子的结合,如 DNA 结合蛋白。同样可能的是,SYBR 101 染料偶联物在核酸结合后荧光增强有助于监测其进入细胞核的转运。固体或半固体基质 (如微球、磁粒子或多种树脂) 的 SYBR 101 染料偶联物可用于核酸的检测或亲和分离。
反应性 SYBR 101 染料也可与胺修饰的核酸偶联。尽管有可能 SYBR 101 染料可能在结合到核酸上的胺基团时显示一些荧光,但它们可能有助于开发均相杂交试验,在该试验中可对特定序列进行定量测定,而无需分离键合探针和游离探针。例如,已使用类似的活性核酸染色剂标记肽-核酸偶联物 (PNA),可用作实时荧光定量 PCR 中的探针。标记的 PNA 探针在与互补序列杂交后显示出荧光增加,已在 10 碱基靶标序列中用于识别单碱基不匹配。
溴化乙锭 (EtBr) 和碘化丙啶 (PI, P1304MP; P3566, P21493) 均为在结构上相似的苯蒽嵌入剂。PI 比 EtBr 更易溶于水,膜渗透性更低,尽管这两种染料通常都被排除在活细胞之外EtBr 和 PI 可使用汞或氙弧灯或者氩离子激光激发,使其适用于荧光显微镜检查、共聚焦激光扫描显微镜检查 ()、流式细胞分析和荧光测定法。这些染料以很少或没有序列偏好结合,化学计量比为每 4–5 个碱基对 DNA 一种染料。 EtBr–DNA 复合物的激发可能会导致染料光漂白和单链断裂。 EtBr 和 PI 都可以与 RNA 结合,需要用核酸酶处理以区分 RNA 和 DNA。这些染料与核酸结合后,荧光增强约 10 倍,其最大激发波长将偏移约 30–40 nm 至红色,其最大发射波长将偏移约 15 nm 至蓝色 (图 8.1.7,经典核酸染色剂特性 - 表 8.4)。尽管其摩尔吸附系数 (消光系数) 相对较低,但 EtBr 和 PI 都表现出足够大的斯托克司频移,以允许同时检测细胞核 DNA 和荧光素标记抗体,前提是使用适当的光学滤光片。
PI 通常用作细胞核或染色体复染剂 (细胞核探针 - 第 12.5 节,) 以及死细胞染色剂 (细胞活力和细胞毒性检定试剂 - 第 15.2 节, )。EtBr 是核酸凝胶染色的常规染料 (凝胶、印迹和阵列上的核酸检测 - 第 8.4 节)。然而,我们的 SYBR Gold 和 SYBR Green 核酸凝胶染色剂的灵敏度远高于 EtBr,而且根据艾姆斯氏试验已经证明 SYBR Green I 染色剂的致突变性明显低于 EtBr (凝胶、印迹和阵列核酸检测 - 第 8.4 节)。此外,我们的 SYBR Safe DNA 凝胶染色剂与 EtBr 一样灵敏,且在标准艾姆斯氏试验中致突变性较低,在三种基于哺乳动物细胞的基因毒性检定中经检测呈阴性,因而根据美国联邦法规不属于危险废物 (凝胶、印迹和阵列核酸检测 - 第 8.4 节) 。
EtBr 和 PI 均为强效致突变剂,处理时必须极其小心。含有 EtBr 或 PI 的溶液可通过活性炭过滤进行清楚有害物质,然后焚烧活性炭,从而提供经济的有害物质清除程序。 或者,可通过在缓冲液中与亚硝酸盐和次磷酸反应来完全降解染料。 PI 作为固体 (P1304MP, P21493) 供货,EtBr 和 PI 作为水溶液供货 (15585-011, P3566)。
碘化乙啶 (H7593) 是一种中等亲脂性的苯甲啶染料,可渗透至哺乳动物细胞中,并且在革兰氏阴性菌存在的情况下环境下选择性地染色几乎所有革兰氏阳性菌。我们的 LIVE BacLight 细菌革兰氏染色试剂盒和 ViaGram Red+ 细菌革兰氏染色剂和活力检测试剂盒 (L7005, V7023; 细胞活力和细胞毒性检测试剂盒 - 第 15.3 节) 使用碘化乙啶来区分细菌革兰氏征 ()。与我们的乙锭或丙啶染料相比,碘化乙啶会在 DNA 结合后产生波长稍短的光谱。通常,真核细胞的细胞质和细胞核都会被碘化乙啶染色;然而,线粒体和核仁也可被染色。
二氢乙啶 (也称为氢乙啶) 是一种化学还原型乙锭衍生物,具有通透性,可在细胞质中显示蓝色荧光。许多活力细胞将探针氧化为乙锭,然后在 DNA 嵌入后发出红色荧光 ()。二氢乙啶具有一定的空气敏感性,供货包装为 25毫克的样品瓶 (D1168) ,或专门包装成 10 瓶每瓶 1 毫克 (D11347);当每次使用少量染料时,强烈建议使用专门包装。二氢乙锭也可作为 5 mM 稳定溶液 (溶于二甲亚砜) 供货 (D23107)。
乙锭同源二聚体-1 (EthD-1, E1169) 和乙锭同源二聚体-2 (EthD-2, E3599) 与 dsDNA、ssDNA、RNA 和寡核苷酸紧密结合,荧光显著增强 (>40 倍)。EthD-1 还能以高亲和力与三链核酸结构结合。 dsDNA 中一分子 EthD-1 可与每四个碱基对结合, 而且这种染料的嵌入不具有序列选择性。 据最初报告,一次只结合两个 EthD-1 苯蒽环中的一个; 后续报告表明,双嵌入似乎参与了双链和三链核酸染色。
EthD-1 和 EthD-2 二聚体的光谱和其他特性几乎相同。然而,EthD-2 的 DNA 亲和力约为 EthD-1 的两倍。EthD-2 与 dsDNA 结合后荧光强度也约为 RNA 的两倍。由于 EthD-1 和 EthD-2 都可以用紫外光或氩离子激光的 488 nm 光谱线激发,因此,任何染料都可与 TOTO-1、YOYO-1 或 SYTOX Green 核酸染色剂结合用于多色实验 (图 8.1.8)。乙锭同源二聚体染料对膜完整的细胞具有非通透性,这种特性使 EthD-1 可用作我们 LIVE/DEAD 细胞活力/细胞毒性试剂盒的一种死细胞指示剂 (L3224, 细胞活力和细胞毒性检测试剂盒 - 第 15.3 节, ) 和 EthD-2 (作为死红核酸染色剂) 也可用作我们 LIVE/DEAD 降低生物危害细胞活力试剂盒#1 的一种合适的死细胞指示剂 (L7013, 不同细胞类型细胞活力和细胞毒性检测试剂盒 - 第 15.3 节, )。这些染料也用于检测溶液中的 DNA, 尽管它们不像我们的 Quant-iT PicoGreen dsDNA 试剂那样灵敏或简单易用 (溶液中的核酸定量 - 第 8.3 节)。
可使用各种 DNA 嵌入剂来共价光标记核酸。单叠氮乙锭 (E1374) 是一种发荧光的光亲和标记物,光解之后,与溶液和细胞膜受损细胞中的核酸共价结合。 单叠氮乙锭共价光标记的量子得率极高 (>0.4)。
据报告,非膜通透性单叠氮乙锭仅可标记死细胞,因此特别适用于检测分析致病性细胞的活力 (细胞活力和细胞毒性检测试剂 - 第 15.2 节)。活细胞和死细胞混合群体经此试剂孵育,可进行照射(采用可见光源)、洗涤、固定,然后进行分析,以测定细胞在光解时的活力。 该方法不仅减少了从事致病性细胞工作中固有的一些危害,而且与需要固定的免疫细胞化学分析兼容。我们开发了用于测定所固定样品原始细胞活力的替代检测方法,并且将这些纳入 LIVE/DEAD 低生物危害细胞活力检测试剂盒 #1 (L7013)和 LIVE/DEAD 可固定死细胞染色剂盒,详见 不同细胞类型用细胞活力和细胞毒性检测试剂盒 - 第 15.3 节。
除了可用作活力指示剂外,单叠氮乙锭还用于不可逆地标记 白色念珠菌 的 DNA,以研究白细胞的吞噬能力。 还采用单叠氮乙锭对DNA 上的药物结合位点进行 "足迹分析" ,以探查 DNA 和转运 RNA (tRNA) 上的乙锭结合位点 ,并在脊椎动物细胞中选择性地光灭活基因表达。
我们提供高纯度的流式细胞分析级吖啶橙,这种染料通过嵌入或静电吸引与 DNA 和 RNA 相互作用。但是,在凝聚染色质中,大部分 DNA 的包装方式不允许吖啶橙有效嵌入。 该阳离子染料与 DNA 结合时,具有绿色荧光,最大发射波长为 525 nm。与 RNA 缔合后,其发射波长飘移至 ~650 nm (红色荧光)。吖啶橙供货有固体 (A1301)以及便于操作的 10 mg/mL 水溶液 (A3568)。
水溶性吖啶二聚体双-(6-氯-2-甲氧基-9-甲氧基) 精胺 (A666)是文献中描述的几种吖啶二聚体之一。这种染料对富含 AT 的核酸区域具有极高亲和力,使其特别适用于染色体分带。 吖啶二聚体与 DNA 结合时会发出蓝绿色荧光,产生的荧光与 AT 碱基对含量的四次方成比例。 由于其亮度和光稳定性更高,已推荐吖啶同源二聚体替代喹啉用于 Q 分带。
ACMA (9-氨基-6-氯-2-甲氧基吖啶, A1324) 是一种 DNA 嵌入剂,可选择性结合 poly(d(AT)),在 pH 值 7.4 时结合亲和力常数为 2 × 105 M-1 。 采用大多数紫外光源激发ACMA-DNA 复合物 (最大激发/ 射波长约为419/483 nm),因而可兼容使用波长更短和更长的染料。ACMA 看来还可与处于激励状态的膜结合,并在形成 pH 梯度时淬灭。 其已广泛应用于追踪阳离子和阴离子的跨膜移动 ,以研究各种膜结合 ATPases 的质子泵活性 (探针在酸性 pH 值下使用 - 第 20.3 节)。
双苯甲亚胺染料 - Hoechst 33258、Hoechst 33342 和 Hoechst34580 - 是细胞膜通透性小沟结合 DNA 染色剂 (图 8.1.1) ,一与 DNA 结合就发出亮蓝色荧光。Hoechst 33342 的膜通透性略高于 Hoechst 33258, 但两种染料均极易溶于水 (可制备高达 2% 溶液) 且相对无毒。这些 Hoechst 染料可通过氩离子激光紫外光谱线和大多数传统荧光激发光源激发,表现出相对较大的斯托克司频移 () (最大激发/发射波长约为 350/460 nm),使其适用于多色标记实验。Hoechst 34580 与核酸结合后具有比其他 Hoechst 染料更长的波长光谱。
Hoechst 33258 和 Hoechst 33342 染料在不与核酸结合时具有复杂的 pH 值依赖性光谱,pH 值 5 时荧光量子得率远高于 pH 值 8 时。十二烷基硫酸钠 (SDS) 等表面活性剂也可增强其荧光。这些染料似乎显示出广谱的序列依赖性 DNA 亲和力,以足够强度结合poly(d(AT)) 序列,从而使它们取代几种已知 DNA 嵌入剂。 它们还表现出多种结合模式和不同荧光发射光谱,但都取决于染料:碱基对比。 Hoechst 染料用于许多细胞用途,包括细胞周期和细胞凋亡研究 (细胞计数、细胞增殖和细胞周期检测分析 - 第 15.4 节, 细胞凋亡检测分析 - 第 15.5 节),它们是常见的细胞核复染剂 (细胞核探针 - 第 12.5 节)。Hoechst 33258 对疟原虫具有选择性毒性, 也可用于对疟原虫血液样本进行流式细胞术筛选,并评估疟原虫对药物的敏感性。
Hoechst 33258 和 Hoechst 33342 染料有的供货形式有固体 (H1398,H1399)、高纯度固体 (H21491,H21492) 和便于操作的 10 mg/mL 水溶液 (H3569, H3570)。Hoechst 34580 染料以固体形式 (H21486) 供货。
DAPI (4',6-二脒基-2 苯基吲哚;D1306,D3571, D21490)一与 DNA 结合就显示蓝色荧光 () ,可使用汞弧灯或氩离子激光紫外线激发。与 Hoechst 染料一样,蓝色荧光 DAPI 染色剂明显与 dsDNA 小沟缔合 (图 8.1.9),优先与 AT 簇结合; 有证据表明 DAPI 还能够结合包含少至两个连续碱基对的 DNA 序列,可能采用了不同的结合模式。 据认为,DAPI 与 AU 选择性的 RNA 采用嵌入结合模式。
据报告,与 RNA 相比,DAPI 对 DNA 的选择性大于溴化乙锭和碘化丙啶显示的选择性。 此外,DAPI–RNA 复合物的最大荧光发射波长比 DAPI–dsDNA 复合物更长(约500 nm 比 约460 nm),但量子产率仅高约 20%。
DAPI 与 dsDNA 结合后,可产生约 20 倍的荧光增强,明显是由于从 DAPI 和小沟槽置换水分子。 尽管 Hoechst 染料在某些应用中可能更明亮一些,但它们与 dsDNA 结合后的光稳定性低于 DAPI。在存在适当的盐浓度下,DAPI 在与 ssDNA 或 GC 碱基对结合后通常不会显示荧光增强。 然而,在与去污剂、 硫酸葡聚糖、 多聚磷酸盐和其他多阴离子结合后,DAPI 的荧光的确显著增加。 Kapuscinski 的一篇综述讨论了 DAPI 与核酸结合的机制、其光谱特性以及它在流式细胞分析和染色体染色中的用途。 DAPI 是一种出色的细胞核复染剂,在染色体中显示出明显的带型 (),我们将其纳入 SelectFX 细胞核标记试剂盒 (S33025,细胞核探针 - 第 12.5 节)。DAPI 可溶于水,但在磷酸盐缓冲盐水中的溶解度有限。
我们还提供与 ProLong Gold 和 SlowFade Gold 抗淬灭试剂预混合的 DAPI (P36931,P36935,S36938,36939;荧光显微镜检配件和参考标准 - 第 23.1 节)。这种核酸染料和抗淬灭试剂的组合可同时染色和保护染色样品免受光漂白。
LDS 751 (L7595) 是一种细胞通透性核算染色剂,已经用于区分完整的有核细胞与无核细胞和受损的有核细胞, 也用于通过流式细胞分析在中性粒细胞、白细胞和单核细胞的混合细胞群中鉴定不同的细胞类型。 LDS 751 对 dsDNA 的激发峰值波长约为 543 nm,可被 488 nm 氩离子激光激发,因为其最大发射长波长约为 712 nm 而特别适用于多色分析。LDS 751 与 dsDNA 结合会产生增强约 20 倍的荧光。当 LDS 751 与 RNA 结合时,我们观察到其最大激发波长显著红移至 590 nm 最大发射波长蓝移至 607 nm,这使得其能够用于区分细胞中的DNA和RNA。有份报告已将 LDS 751 这个名称归因于一种称为 styryl 8 的染料; 但是,它们的化学结构并不相同。
Nissl 物质由 Franz Nissl 在100多年前进行过描述,是神经元细胞所特有的。 Nissl 物质由大量的粗面内质网组成,反映了神经元细胞异常高的蛋白质合成能力。各种荧光或发色 "Nissl 染色剂" 已经用于这种复染,包括吖啶橙、 溴化乙锭、 中性红 (N3246, 细胞活力和细胞毒性监测分析试剂 - 第 15.2 节)、甲酚紫、 亚甲蓝、藏红-O 和甲苯胺蓝-O。 我们已经开发了五种荧光 Invitrogen™ Molecular Probes™ Neuro Trace™ Nissl 染色剂 (NeuroTrace 荧光 Nissl 染色剂荧光特性 - 第 14.2 节),从而不仅为神经元染色提供了广谱的荧光颜色,而且还比传统染料敏感得多:
此外,Nissl物质在受损或再生神经元的细胞体内重新分布。因此,这些Nissl染色剂还可以充当标志物,用于物理或化学诱导的神经结构损伤。 用 RNase 预处理组织样本即可完全消除 Nissl 染色剂的染色;然而,这些染料并非溶液中RNA的特异性染色剂。NeuroTrace 500/525 绿色荧光Nissl染色剂 (N21480) 的强荧光 (最大发射波长约为515–520 nm),使得其成为首选染料,可与橙色或红色荧光神经解剖学示踪剂(例如DiI )(D282, D3911, V22885; 膜标记示踪剂 - 第 14.4 节)组合用作复染剂。
7-AAD (7-氨基放线菌素 D, A1310) 是一种荧光嵌入剂,与 DNA 结合时发生光谱位移。7-AAD–DNA 复合物可由氩离子激光激发,发射波长超过 610 nm (经典核酸染色剂的特性 - 表 8.4,图 8.1.7),使该核酸染色剂可用于多色荧光显微镜检查 ()、共聚焦激光扫描显微镜检查以及流式细胞术免疫表型分析。 7-AAD 似乎通常被活细胞排除在外,但有报告称其可标记活培养的小鼠 L 细胞的核区和 摇蚊 幼虫的唾液腺多线染色体。 7-AAD 选择性地结合 DNA 的 GC 区, 在多线染色体和染色质中产生截然不同的带型。 该序列选择性已被用于染色体分带研究。
竹桃霉素 D (A7592) 是一种非荧光嵌入剂,具有较高的 GC 选择性,并在其结合位点引起变形。 非荧光放线菌素 D 与核酸的结合会改变染料的吸光度。 与 7-AAD 一样,放线菌素 D 已用于染色体分带研究。 据报告,放线菌素 D 与 ssDNA 结合可抑制逆转录酶和其他聚合酶。
羟芪巴脒 (H22845) 是一种很有趣的核酸构象探针;其核酸染色特性于 1973 年首次描述。 羟芪巴脒是一种非嵌入染料,表现出 AT 选择性结合,据报告其有利于具有二级结构的核酸区域。通过结合等温线 和温度跳变松弛研究对羟芪巴脒与 DNA 之间的相互作用进行了研究。
羟芪巴脒一与核酸结合就具有一些独特的光谱特性。在 pH 值为 5 时,这种游离染料在约330 nm 和约390 nm 处具有最大紫外激发波长,双发射波长约为 450 nm 和 600 nm (图 8.1.10)。尽管与 DNA 结合时红色荧光组分仍然存在,但在该染料与 RNA 结合时从未观察到,从而在这两种类型的核酸之间可能存在区分。但当该染料与 RNA 结合时,从未观察到允许在这两种核酸之间进行潜在区分。一与 DNA 结合,其异染色质性荧光就增强,且与 AT 碱基对含量的平方成正比。据报告,羟芪巴脒与小牛胸腺 DNA 和 T5 DNA结合时会发出红色荧光,与 溶壁微球菌 DNA 结合时会发橙色荧光,遇多聚腺苷酸 [poly(d(AT))]发蓝紫荧光。 其已被用于治疗骨髓瘤,选择性地与骨髓瘤细胞结合。
Mugatroyd 描述了使用羟芪巴脒的异染色质性荧光特性对石蜡切片中的 DNA (带黄色荧光)、粘度和弹性纤维进行选择性永久染色。 他还报告:根据 鼠伤寒沙门氏菌 艾姆斯氏试验,羟芪巴脒 (作为其异硫酸盐,我们目前不提供) 为非致突变性。
图 8.1.10 羟芪巴脒与不同形式的 DNA 结合后的荧光光谱。羟芪巴脒 (H22845) 与小牛胸腺 DNA (红色) 或 poly (d (A)) 和 poly (d (T) 均聚物 (蓝色) 混合于 50 mM 醋酸钠中 (pH 值 5.0) 进行孵育。当染料与富含 AT 的 DNA 结合时,荧光发射光谱发生变化,而小牛胸腺基因组 DNA 则不同。
LDS 751 (L7595) 是一种细胞通透性核算染色剂,已经用于区分完整的有核细胞与无核细胞和受损的有核细胞, 也用于通过流式细胞分析在中性粒细胞、白细胞和单核细胞的混合细胞群中鉴定不同的细胞类型。 LDS 751 对 dsDNA 的激发峰值波长约为 543 nm,可被 488 nm 氩离子激光激发,因为其最大发射长波长约为 712 nm 而特别适用于多色分析。LDS 751 与 dsDNA 结合会产生增强约 20 倍的荧光。当 LDS 751 与 RNA 结合时,我们观察到其最大激发波长显著红移至 590 nm 最大发射波长蓝移至 607 nm,这使得其能够用于区分细胞中的DNA和RNA。有份报告已将 LDS 751 这个名称归因于一种称为 styryl 8 的染料; 但是,它们的化学结构并不相同。
Nissl 物质由 Franz Nissl 在100多年前进行过描述,是神经元细胞所特有的。 Nissl 物质由大量的粗面内质网组成,反映了神经元细胞异常高的蛋白质合成能力。各种荧光或发色 "Nissl 染色剂" 已经用于这种复染,包括吖啶橙、 溴化乙锭、 中性红 (N3246, 细胞活力和细胞毒性监测分析试剂 - 第 15.2 节)、甲酚紫、 亚甲蓝、藏红-O 和甲苯胺蓝-O。 我们已经开发了五种荧光 Invitrogen™ Molecular Probes™ Neuro Trace™ Nissl 染色剂 (NeuroTrace 荧光 Nissl 染色剂荧光特性 - 第 14.2 节),从而不仅为神经元染色提供了广谱的荧光颜色,而且还比传统染料敏感得多:
此外,Nissl 物质在受损或再生神经元的细胞体内重新分布。因此,这些Nissl染色剂还可以充当标志物,用于物理或化学诱导的神经结构损伤。 用 RNase 预处理组织样本即可完全消除 Nissl 染色剂的染色;然而,这些染料并非溶液中RNA的特异性染色剂。NeuroTrace 500/525 绿色荧光Nissl染色剂 (N21480) 的强荧光 (最大发射波长约为515–520 nm),使得其成为首选染料,可与橙色或红色荧光神经解剖学示踪剂(例如DiI )(D282, D3911, V22885; 膜标记示踪剂 - 第 14.4 节)组合用作复染剂。
货号 | MW | 储存 | 可溶 | 绝对值 | EC | Em | 溶剂 | 注 |
---|---|---|---|---|---|---|---|---|
A666 | 685.69 | L | DMSO, DMF | 431 | ND | 498 | H2O/DNA | 1、2 |
A1301 | 301.82 | L | H2O, EtOH | 500 | 53000 | 526 | H2O/DNA | 3、4 |
A1310 | 1270.45 | F,L | DMF, DMSO | 546 | 25000 | 647 | H2O/DNA | 3 |
A1324 | 258.71 | L | DMF, DMSO | 412 | 8200 | 471 | MeOH | 5 |
A3568 | 301.82 | RR,L | H2O | 500 | 53000 | 526 | H2O/DNA | 3, 4, 6 |
A7592 | 1255.43 | F,L | DMF, DMSO | 442 | 23000 | 无 | MeOH | |
B3582 | 1202.66 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 462 | 114000 | 481 | H2O/DNA | 3, 6, 7, 8 |
B3586 | 1254.73 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 570 | 148000 | 604 | H2O/DNA | 3, 6, 7, 8 |
D1168 | 315.42 | FF,L,AA | DMF, DMSO | 355 | 14000 | 见注释 | 乙腈 | 9、10 |
D1306 | 350.25 | L | H2O, DMF | 358 | 24000 | 461 | H2O/DNA | 3, 11 |
D3571 | 457.49 | L | H2O, MeOH | 358 | 24000 | 461 | H2O/DNA | 3, 11 |
D11347 | 315.42 | FF,L,AA | DMF, DMSO | 355 | 14000 | 见注释 | 乙腈 | 9, 10 |
D21490 | 350.25 | L | H2O, DMF | 358 | 24000 | 461 | H2O/DNA | 3, 11, 12 |
D23107 | 315.42 | FF,D,L,AA | 二甲基亚砜 | 355 | 14,000 | 见注释 | 乙腈 | 10, 13 |
E1169 | 856.77 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 528 | 7000 | 617 | H2O/DNA | 3, 7, 14 |
E1374 | 420.31 | F,LL | DMF, EtOH | 462 | 5400 | 625 | pH 7 | 15 |
E3599 | 1292.71 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 535 | 8000 | 624 | H2O/DNA | 3, 6, 7, 14 |
H1398 | 623.96 | L | H2O, DMF | 352 | 40,000 | 461 | H2O/DNA | 3, 16, 17 |
H1399 | 615.99 | L | H2O, DMF | 350 | 45000 | 461 | H2O/DNA | 3, 16, 18 |
H3569 | 623.96 | RR,L | H2O | 352 | 40000 | 461 | H2O/DNA | 3, 6, 16, 17 |
H3570 | 615.99 | RR,L | H2O | 350 | 45000 | 461 | H2O/DNA | 3, 6, 16, 18 |
H7593 | 497.42 | L | 二甲基亚砜 | 518 | 3900 | 600 | H2O/DNA | 3, 19 |
H21486 | 560.96 | L | 二甲基亚砜 | 392 | 47000 | 440 | H2O/DNA | 3 |
H21491 | 623.96 | L | H2O, DMF | 352 | 40000 | 461 | H2O/DNA | 3, 12, 16, 17 |
H21492 | 615.99 | L | H2O, DMF | 350 | 45000 | 461 | H2O/DNA | 3, 12, 16, 18 |
H22845 | 472.53 | F,D,L | H2O, DMSO | 360 | 27000 | 625 | H2O/DNA | 3, 20 |
J11372 | 1272.63 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 530 | 171000 | 545 | H2O/DNA | 3, 6, 7, 8 |
J11373 | 630.31 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 532 | 94000 | 544 | H2O/DNA | 3, 6, 7, 8 |
L7595 | 471.98 | L | DMSO, EtOH | 543 | 46000 | 712 | H2O/DNA | 3 |
N21479 | 见注释 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 435 | 见注释 | 457 | H2O/RNA | 6, 8, 21 |
N21480 | 见注释 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 497 | 见注释 | 524 | H2O/RNA | 6, 8, 21 |
N21481 | 见注释 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 515 | 见注释 | 535 | H2O/RNA | 6, 8, 21 |
N21482 | 见注释 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 530 | 见注释 | 619 | H2O/RNA | 6, 8, 21 |
N21483 | 见注释 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 644 | 见注释 | 663 | H2O/RNA | 6, 8, 21 |
N21485 | 651.01 | L | 二甲基亚砜 | 355 | 36000 | 495 | H2O/DNA | 3 |
O7582 | 见注释 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 498 | 见注释 | 518 | H2O/DNA | 6, 8, 21 |
P1304MP | 668.40 | L | H2O, DMSO | 535 | 5400 | 617 | H2O/DNA | 3、22 |
P3566 | 668.40 | RR,L | H2O | 535 | 5400 | 617 | H2O/DNA | 3, 6, 22 |
P3580 | 1170.53 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 434 | 92000 | 456 | H2O/DNA | 3, 6, 7, 8 |
P3581 | 579.26 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 435 | 50,000 | 455 | H2O/DNA | 3, 6, 7, 8 |
P3584 | 1222.61 | F,D,L | DMF | 534 | 146000 | 570 | H2O/DNA | 3, 6, 7, 8 |
P3585 | 605.30 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 539 | 88000 | 567 | H2O/DNA | 3, 6, 7, 8 |
P7581 | 见注释 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 502 | 见注释 | 523 | H2O/DNA | 6, 8, 21 |
P11495 | 见注释 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 502 | 见注释 | 523 | H2O/DNA | 6, 8, 21 |
P21493 | 668.40 | L | H2O, DMSO | 535 | 5400 | 617 | H2O/DNA | 3, 12, 22 |
R11491 | 见注释 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 500 | 见注释 | 525 | H2O/RNA | 6, 8, 21 |
S7020 | 约600 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 504 | 67000 | 523 | H2O/DNA | 3, 6, 8, 23 |
S7556 | 约500 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 494 | 43000 | 517 | H2O/DNA | 3, 6, 8, 23 |
S7559 | 约550 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 490 | 58000 | 515 | H2O/DNA | 3, 6, 8, 23 |
S7560 | 约450 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 521 | 57000 | 556 | H2O/DNA | 3, 6, 8, 23 |
S7573 | 约400 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 508 | 75000 | 527 | H2O/DNA | 3, 6, 8, 23 |
S7574 | 约300 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 500 | 54000 | 522 | H2O/DNA | 3, 6, 8, 23 |
S7575 | 约400 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 488 | 74000 | 509 | H2O/DNA | 3, 6, 8, 23, 24 |
S7576 | 约500 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 517 | 60000 | 549 | H2O/DNA | 3, 6, 8, 23 |
S7578 | 约450 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 488 | 42000 | 518 | H2O/DNA | 3, 6, 8, 23 |
S7579 | 约650 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 621 | 88000 | 634 | H2O/DNA | 3, 6, 8, 23 |
S11341 | 约550 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 622 | 112000 | 645 | H2O/DNA | 3, 6, 8, 23 |
S11342 | 约500 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 652 | 83000 | 678 | H2O/DNA | 3, 6, 8, 23 |
S11343 | 约500 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 620 | 85000 | 647 | H2O/DNA | 3, 6, 8, 23 |
S11344 | 约550 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 649 | 76000 | 680 | H2O/DNA | 3, 6, 8, 23 |
S11345 | 约550 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 654 | 119000 | 675 | H2O/DNA | 3, 6, 8, 23 |
S11346 | 约400 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 598 | 84000 | 620 | H2O/DNA | 3, 6, 8, 23 |
S11348 | 约400 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 445 | 38000 | 470 | H2O/DNA | 3, 6, 8, 23 |
S11351 | 约250 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 419 | 33000 | 445 | H2O/DNA | 3, 6, 8, 23 |
S11352 | 约450 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 426 | 34000 | 455 | H2O/DNA | 3, 6, 8, 23 |
S11353 | 约350 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 430 | 31000 | 460 | H2O/DNA | 3, 6, 8, 23 |
S11356 | 约300 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 452 | 43000 | 484 | H2O/DNA | 3, 6, 8, 23 |
S11361 | 约400 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 531 | 89000 | 545 | H2O/DNA | 3, 6, 8, 23 |
S11362 | 约300 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 530 | 82,000 | 544 | H2O/DNA | 3, 6, 8, 23 |
S11363 | 约350 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 541 | 76000 | 560 | H2O/DNA | 3, 6, 8, 23 |
S11364 | 约350 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 543 | 68000 | 559 | H2O/DNA | 3, 6, 8, 23 |
S11365 | 约500 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 567 | 95000 | 582 | H2O/DNA | 3, 6, 8, 23 |
S11366 | 约350 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 567 | 86000 | 583 | H2O/DNA | 3, 6, 8, 23 |
S11368 | 约500 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 547 | 79000 | 570 | H2O/DNA | 3, 6, 8, 23 |
S21500 | 约600 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 494 | 57000 | 519 | H2O/DNA | 3, 8, 23 |
S32703 | 约800 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 491 | 107000 | 532 | H2O/RNA | 3, 6, 8, 23 |
S32704 | 约350 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 484 | 67000 | 505 | H2O/DNA | 3, 6, 8, 23 |
S34854 | 约400 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 483 | 65000 | 503 | H2O/DNA | 3, 6, 8, 23 |
S34855 | 约400 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 480 | 66000 | 502 | H2O/DNA | 3, 6, 8, 23 |
S34857 | 约400 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 445 | 38000 | 470 | H2O/DNA | 3, 6, 8, 23 |
S34859 | 约450 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 640 | 92000 | 658 | H2O/DNA | 3, 6, 8, 23 |
S34860 | 约600 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 504 | 67000 | 523 | H2O/DNA | 3, 6, 8, 23 |
S34861 | 约500 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 547 | 79000 | 570 | H2O/DNA | 3, 6, 8, 23 |
T3600 | 1302.78 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 514 | 117000 | 533 | H2O/DNA | 3, 6, 7, 8 |
T3602 | 645.38 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 515 | 63,000 | 531 | H2O/DNA | 3, 6, 7, 8 |
T3604 | 1354.85 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 642 | 154000 | 660 | H2O/DNA | 3, 6, 7, 8 |
T3605 | 671.42 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 642 | 102000 | 661 | H2O/DNA | 3, 6, 7, 8 |
T7596 | 697.46 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 747 | 108000 | 770 | H2O/DNA | 3, 6, 7, 8 |
Y3601 | 1270.65 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 491 | 99000 | 509 | H2O/DNA | 3, 6, 7, 8 |
Y3603 | 629.32 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 491 | 52000 | 509 | H2O/DNA | 3, 6, 7, 8 |
Y3606 | 1322.73 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 612 | 167000 | 631 | H2O/DNA | 3, 6, 7, 8 |
Y3607 | 655.36 | F,D,L | 二甲基亚砜 | 612 | 100000 | 631 | H2O/DNA | 3, 6, 7, 8 |
15585011 (EtBr) | 394.31 | RR,L | H2O | 518 | 5200 | 605 | H2O/DNA | 3, 6, 25 |
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仅供研究使用。不可用于人或动物的治疗或诊断。
仅供科研使用,不可用于诊断目的。