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许多自下而上蛋白质组学研究也受益于高通量自上而下质谱分析。自上而下方法的主要优点包括检测降解产物和序列变异,这有助于解决推理问题(例如同源异构体、蛋白质变体),以及确定用于蛋白质化学计量和动力学分析的翻译后修饰 (PTM)。
高分辨精确质量数 (HRAM) 质谱对自上而下蛋白质组学来说是必不可少的。HRAM MS 既能共洗脱完整蛋白质,又能显示高电荷大型完整蛋白质的同位素峰,因此可准确测定电荷态和质量。此外,由于完整蛋白质裂解过程中会产生大量产物离子,所以需要通过高分辨率质量分析来准确检测产物离子特性,并将其分配给由此产生的高度复杂的 MS/MS 谱。
除了 HRAM-MS 之外,新型高动态 (HD) 范围电子转移碎裂 (ETD) 可裂解数量更多的前体离子,从而提高了检测限和动态范围。ETD HD 实验的效率更高,能以更快的采集速度覆盖更大序列,使人们有可能在液相色谱 (LC) 时间范围内开展新的 ETD 实验。
UVPD 是一种使用 213 nm 紫外激光实现的新型裂解技术,可提高自上而下分析的序列覆盖率。
成功的自上而下蛋白质组学需要降低样品复杂性。蛋白质相互之间和不同蛋白质变体之间的分辨率增加了通过质谱分析实现成功表征的可能性。Thermo Scientific ProSwift RP-4H LC 色谱柱是在质谱分析之前分离完整蛋白质的理想选择,专为微升到纳升级流动而设计。
在纳流、毛细管和微流 UHPLC 系统中以较佳性能、生产力和可用性追求下一个科学突破。Vanquish Neo UHPLC 系统 整合了出色的创新技术,可全天候以极佳性能为各种高灵敏度工作流程提供复杂混合物可重现的分离。
当今的前沿研究推动 LC-MS 超越极限。更快地获取高置信度的洞察信息,以准确分辨细微差异并避免代价高昂的死胡同,这一需求比以往任何时候都更为迫切。Thermo Scientific Orbitrap Eclipse Tribrid 质谱仪借助新型创新技术超越了这些极限,提供了扩展实验范围的极高灵活性,并具有内置智能以确保获得极高的数据质量和信心。通过单一系统提供出色洞察力,助您高效地突破当前科研成果。
使用 Thermo Scientific ProSightPC 软件分析自上、中而下的蛋白质组学数据并表征 PTM。该软件可处理自上/中而下实验中多个裂解技术(ETD、EThcD、HCD 和 CID)和 HRAM MS/MS 产生的结果。这款蛋白质组学软件能够将 MS/MS 数据与 UniProt 等蛋白质组库进行比较。五种不同的搜索模式有助于确定精确的蛋白质序列和 PTMS 及剪接。ProSightPC 可在 Thermo Scientific Proteome Discoverer 软件中作为节点。