Fluo-3 钙指示剂 | Thermo Fisher Scientific

作为高灵敏度染料，可快速测量细胞内的钙通量
荧光大幅增强（通常 >100 倍），因而具有良好灵敏度
广泛用于基于细胞的 HTS 应用
采用能够激发可见光的染料，因此减少了自发荧光和细胞光损伤问题，并且可通过大多基于激光的仪器（包括共聚焦激光扫描显微镜和流式细胞仪）实现有效激发

Ca²⁺ 指示剂 fluo-3（图1）由 Tsien 及其同事研发，与流式细胞仪和共聚焦激光扫描显微镜中的可见光激发源搭配使用。自1989年推出以来，fluo-3 成像揭示了许多初级钙信号转导过程的空间动力学。 Fluo-3 还广泛用于以下用途：流式细胞分析；涉及“笼状”螯合物、第二信使和神经递质光活化的实验；以及基于细胞的药物筛查。

在这些应用中，fluo-3 的最重要特性是吸收光谱兼容氩离子激光源在 488 nm 处的激发并且与 Ca²⁺ 结合相关的荧光强度大幅增加（图2）。在结合 Ca²⁺ 时，Fluo-3、fluo-4 及其衍生物都出现大幅的荧光强度增加。与激发紫外光的指示剂 fura-2 和 indo-1 不同，没有同时发生光谱偏移。Ca²⁺ 结合时的荧光强度增加通常 >100 倍。表1显示了 fluo-3 和 fluo-4 的物理和光谱特性比较。

molecular-probes.par.71542.image.400.416.1.g001108-gif

图1.Fluo 指示剂。

molecular-probes.par.37294.image.342.303.1.g001040-gif

图2. fluo-3（F1240、F3715）的 Ca²⁺ 依赖性荧光发射光谱。不含 Ca²⁺ 的溶液的光谱与基线无区别。

表1. fluo-3 和 fluo-4 的物理和光谱特性比较。

特性	fluo-3	fluo-4
Kd (Ca²⁺)*	325 nM	345 nM
吸收最大值（已结合 Ca2+）†	506 nm	494 nm
最大值（已结合 Ca²⁺）†	100,000 cm^-1M^-1	88,000 cm^-1M^-1
488 nm（已结合 Ca²⁺）†	43,000 cm^-1M^-1	77,000 cm^-1M^-1
发射最大值（已结合 Ca²⁺）†	526 nm	516 nm
QY（已结合 Ca²⁺）†、‡	0.15	0.14
Fmax /Fmin §	>100	>100

* 22°C 下，在 100 mM KCl、10 mM MOPS (pH 7.2)、0 至 10 mM CaEGTA 中测定的 Ca²⁺ 解离常数。对于 fluo-3，Kd = 390 nM，报告来源：Molecular Probes’ The Handbook: A Guide to Fluorescent Probes and Labeling Technologies, Tenth Edition (2005)。
† 22°C下，在 100 mM KCl、10 mM MOPS (pH 7.2)、含 39.8 μM 游离 Ca²⁺ 的溶液中测定的值。
‡ QY = 荧光量子得率。对于 fluo-3，QY = 0.18，报告来源：J Biol Chem 264, 8171 (1989)。
§ 在溶液检测中结合 Ca²⁺ 时荧光强度增加。

仅供科研使用，不可用于诊断目的。

CMD SchemaApp code