Tango GPCR 检测系统 | Thermo Fisher Scientific

Tango GPCR 检测系统的读数具有以下特点：

对于目标受体特异—确保获得选择性读数
靠近受体激活的实际位点—最大限度地减少假阳性
不受传递受体信号的 G 蛋白影响—因此可对任何 GPCR（包括孤儿 GPCR）进行研究

Tango GPCR 检测系统（图1）是一个专有平台，所依据的是配体与特异性 G 蛋白偶联受体 (GPCR) 结合而触发脱敏，此过程由蛋白酶标记的抑制蛋白向活化受体的募集介导。蛋白酶标记的抑制蛋白切割融合到 GPCR C 末端的蛋白酶位点，释放出非天然转录因子。

该转录因子立即进入细胞核，从而绕过额外的信号传导中间体。从中，该转录因子直接调控 β-内酰胺酶报告构建体的转录，在添加活细胞底物时对此进行测量（图2）。获得的蓝色与绿色荧光比率与激动剂或拮抗剂对受体的调节直接相关。根据报告基因的活化，可定量测定靶受体与蛋白酶标记的抑制蛋白配偶体之间的相互作用程度。

图1.GPCR 的 Tango 检测系统示意图。配体与靶受体的结合会刺激抑制蛋白蛋白酶的募集，从而触发受束缚转录因子的释放。游离转录因子进入细胞核并刺激报告基因活性。这项基于细胞的测定可直接且选择性地测定靶 GPCR 活性，且适用于几乎所有类别的 GPCR。

使用各种 GPCR 进行校验

已使用各种 GPCR 对 Tango GPCR检测进行了验证，其中包括与每种主要 G 蛋白通路相关并由多种配体类型激活的受体：

Gq-、Gs- 和 Gi/o-偶联受体
孤儿 GPCR
激素受体
神经递质受体
肽受体
趋化因子受体

图2.使用 GeneBLAzer 技术对 β-内酰胺酶报告基因反应进行荧光检测。加入底物后，若不存在 β-内酰胺酶表达，则细胞会产生绿色荧光。若存在 β-内酰胺酶表达，则底物被切割，细胞产生蓝色荧光。

激动剂和拮抗剂检测

使用 Tango GPCR 检测系统可以准确地定量测定 GPCR 激活和抑制蛋白募集。此方法非常适合高通量筛选 (HTS) 应用，并且非常适合小型化。Tango GPCR 细胞系可用于监测激动剂介导的受体激活，评估不同化合物的相对效力以及测量特定拮抗剂引起的受体失活（图4）。读数同样特异于靶受体（图3）。

Tango Target Selectivity

图3.靶标选择性。使用 Tango GPCR 细胞系和分析服务，可以选择性地检测您感兴趣的靶受体。在 HEK 293 细胞中表达抗利尿激素 V2 受体，并使用钙通量检测法和 Tango 检测法测定其活性。通常，用抗利尿激素（靶受体的配体）以及卡巴胆碱和 ATP（HEK 293 细胞中内源性非靶受体的配体）处理细胞，会在钙通量检测中产生无法区分的信号。相比之下，仅在使用靶受体的同源配体进行刺激时，Tango GPCR 细胞系才会产生信号。