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内质网(ER)是由与核膜外膜相连的囊泡、小管和囊泡网络组成的细胞器。内质网有两种形式:光滑内质网和粗糙内质网。光滑内质网的具体功能因细胞类型而异,但通常参与脂质和类固醇的合成、解毒和钙离子平衡。粗糙内质网由核糖体构成,是蛋白质合成的场所。这些蛋白质在内质网中聚集,以便在整个细胞中进行运输。
内质网标记抗体有助于研究内质网的结构和功能。内质网标记抗体还有助于阐明蛋白质在内质网中或受内质网影响的各种任务中可能发挥的作用。内质网标记抗体在标记固定细胞方面特别有用。Invitrogen 内质网标记抗体旨在可靠地检测内质网的关键靶标。每种抗体都经过验证可用于各种应用。主要内质网标记物靶标包括:
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在正常脱蜡的人扁桃体组织上进行的 SERCA2 ATP 酶免疫组织化学检测。为了暴露目标蛋白,使用 10mM 柠檬酸钠(pH 6.0)缓冲液进行热诱导抗原修复,微波加热 8-15 分钟。抗原修复后,组织在 3% BSA-PBS 中室温封闭 30 分钟。然后,在 4°C 的加湿箱中,用识别 SERCA2 ATP 酶的小鼠单克隆抗体(目录号:MA3-919)以 1:200 的稀释度对组织进行检测,或者不使用初抗原(阴性对照)进行检测,持续一夜。用 PBST 彻底清洗组织,并用过氧化物酶抑制剂抑制内源性过氧化物酶活性。使用生物素偶联的二抗和 SA-HRP 进行检测,然后用DAB进行比色检测。用苏木精对组织进行复染,并准备进行封片。
对 U2OS 细胞中的 Phalloidin(绿色)和 Calreticulin(红色)进行免疫荧光分析。用 0.1% Triton X-100 在 PBS 中固定福尔马林细胞,室温下渗透10分钟,用 2% BSA(目录号:37525)在 PBS + 0.1% Triton X-100 中进行封闭,室温下 30 分钟。用钙网蛋白多克隆抗体(目录:PA3-900)在室温下以 1:75 的稀释度对细胞进行至少 1 小时的检测,用 PBS 清洗,并在室温下用 DyLight 633 山羊抗兔 IgG 二抗(目录号:35562)以 1:250 的稀释度孵育 30 分钟。用 1:300(最终浓度为 1 µg/mL) 的DyLight 488 Phalloidin (目录号:21833)对肌动蛋白进行染色,用 1 µg/mL 浓度的Hoechst(目录号:62249)对细胞核(蓝色)进行染色,持续 30 分钟。在Thermo Scientific ArrayScan VTI 上以 20 倍放大率拍摄图像。