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多糖分析
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Applied Biosystems GlycanAssure HyPerformance APTS 系统是一套快速的 N-糖释放、标记和纯化系统，样品制备和聚糖分析方法灵活，同时通过完全去糖基化、保留唾液酸以确保数据准确一致。该工作流程可以手动和无需手动的自动化方式运行，提供出色的 N-聚糖产量和重现性，可通过高通量毛细管电泳 (CE) 或液相色谱 (LC) 平台进行分析。
Applied Biosystems GlycanAssure HyPerformance APTS 试剂盒
GlycanAssure HyPerformance APTS 工作流程可提供无缝的聚糖样品制备解决方案，用于高通量克隆选择至低通量表征/批次放行——使其成为满足所有聚糖分析需求的理想解决方案。使用 GlycanAssure HyPerformance APTS 试剂盒进行的样品制备是一个简单的 3 步骤工作流程，所需样品制备时间总计不到 1.5 小时。
采用 AutoMate Express 的 GlycanAssure AutoXpress APTS 工作流程
GlycanAssure AutoXpress APTS 试剂盒将 GlycanAssure HyPerformance APTS 试剂与 Applied Biosystems AutoMate Express 仪器相结合，提供了一种近乎无需手动操作的工作流程解决方案。
- 3 步法 N-聚糖样品制备完全自动化平台
- GlycanAssure HyPerformance 试剂以预充纯化柱的形式提供
- 13 份样本的制备时间为 1.75 小时
- 手动操作时间为 5 分钟
基于CE 或 LC 分析的完全自动化工作流程
维持高质量的同时简化样品制备
GlycanAssure HyPerformance APTS 系统通过缩短手动操作时间，为如今的聚糖样品制备工作流程所面临的挑战提供简易的解决方案。该工作流程利用新型快速试剂进行完全去糖基化、磁珠法样品制备和可保留唾液酸的荧光染料标记。标记的聚糖可使用Vanquish Horizon UHPLC液相色谱分析或 Applied Biosystems 3500XL 蛋白质量分析仪进行高通量毛细管电泳分析。其自动化和手动工作流程均提供端到端单样品制备解决方案，适于从高通量克隆筛选到低通量药品 QC放行的应用。
Figure 1. GlycanAssure HyPerformance workflow simplifies glycan sample preparation into three steps.
手动工作流程
- 简化的 3 步工作流程
- 利用全新的变性剂在 10 分钟内实现完全去糖基化
- 利用磁珠法工作流程实现高回收率和可重现结果
- 样品制备总时间 ＜ 1.5 小时
- 支持 96 孔样品制备
通过可保留唾液酸的完全去糖基化确保非凡数据质量
有效的聚糖释放方法是准确分析的必要条件。GlycanAssure HyPerformance APTS 试剂盒使用一种新型快速试剂，可在 10 分钟内完成去糖基化，且效率与耗时的过夜方法相同。 这使您可以捕获所有重要的聚糖。
Click to enlargeLC glycan profile of human IgG. Overlay of overnight (pink) and 10 minute (black) deglycosylation methods.
Click to enlargeComparison of relative area (RA) of glycan peaks identified in human IgG from 10 minute and overnight deglycosylation methods.
许多聚糖样品制备和标记方法会引起去唾液酸作用。GlycanAssure HyPerformance APTS 试剂盒中专有的化学成分可确保唾液酸保留。
Click to enlargeIn Capillary Electrophoresis, highly sialylated glycans migrate based on charge at the beginning of the electropherogram, enabling accurate quantitation.
值得信赖的聚糖分析
手动和自动化工作流程制备的样品均可通过高通量 3500 多毛细管 CE 或 Vanquish UHPLC 进行分析，为聚糖分析提供灵活的选择。无论采用何种分析方法，GlycanAssure HyPerformance APTS 试剂盒的优化工作流程都能产生高度可重现且稳健的结果。通过 LC 或高通量 CE 分析可获取高质量数据，其结果在不同样品类型间具有可比性。
RNaseB 的 CE 及 LC 结果比较
Click to enlargeComparison of CE and LC results for high mannose species RNaseB. Identification of major peaks are comparable with both methods.
Click to enlargeComparison of relative area of mannose peaks identified in RNaseB when analyzed by CE and LC. %RA of mannose species is comparable when analyzed with both methods.
CE 及 LC 上的治疗性蛋白 N-聚糖分析 %RA 分析结果近乎相同
Click to enlargeComparison of CE and LC results for a protein therapeutic. %RA is indicated above each peak.
高通量数据分析
GlycanAssure Glycan 分析系统的灵活性使其可在用于蛋白质量分析的 3500xL 基因分析仪上同时分析多达 24 份样品，实现高通量和高分辨率的聚糖分析。仅需 1 -2 ul 样品即可实现高可重现性和高分离效率。 进行六次独立的样品制备，然后在 3500xL CE 仪器上进行分析，结果鉴定出的所有峰的 CV 小于 10％，证明 GlycanAssure 检测试剂盒具有高度可重现性。
The Applied Biosytems 3500xl Genetic Analyzer for Protein Quality Analysis
Figure X. Overlay of 6 independent sample preparations followed by CE. The flexibility of the GlycanAssure Glycan Analysis system allows for parallel analysis of up to 24 samples on the 3500xL Genetic Analyzer for Protein Quality Analysis for high-throughput and high-resolution glycan analysis. Only 1 -2 ul of sample is required while providing great reproducibility with high separation efficiency. Six independent sample preparations followed by analysis on the 3500xL CE instrument yielded a CV of less than 10% for all identified peaks demonstrating the high reducibility of the GlycanAssure assay.
| 峰# | 聚糖 | 平均面积 % | CV% |
| 1 | A2 | 0.33% | 9.23 |
| 2 | A2F | 2.2% | 10.12 |
| 3 | A2FB | 1.97% | 8.4 |
| 4 | G1FS1 | 3.56% | 3.9 |
| 5 | 未知 | 0.31% | 5.32 |
| 6 | A1 | 0.52% | 3.22 |
| 7 | A1F | 12.61% | 4.35 |
| 8 | A1FB | 1.92% | 4.87 |
| 9 | G0F | 23.61% | 4.01 |
| 10 | G1FS1 | 0.77% | 5.13 |
| 11 | G0FB | 4.36% | 4.17 |
| 12 | G1F | 19.49% | 3.46 |
| 13 | G1F' | 9.82% | 3.38 |
| 14 | G1FB | 4.15% | 1.98 |
| 15 | 未知 | 0.48% | 5.1 |
| 16 | G2F | 12.84% | 2.5 |
| 17 | G2FB | 1.07% | 5.02 |
表 Y. 6 次独立样品制备后 CE 分析产生的主要聚糖峰值平均 %RA 及 CV
并行样品分析能力避免了通过缩短运行时间来实现高通量的需要。用于蛋白质量分析的 3500 系列系统配有集成的试剂盒专用 GlycanAssure 数据采集和数据分析软件，可实现最佳性能和用户体验。
一流的 UHPLC 表征
Thermo Scientific Vanquish Flex UHPLC 带有荧光检测功能，可实现可靠的 GlycanAssure HyPerformance 标记聚糖分离。凭借完全生物相容的流路、经过验证的合规性以及无需工具的 Thermo Scientific Viper 接头，您将在标记聚糖 UHPLC 保留时间稳定性、灵敏度和分离效率方面实现出色性能。
Triplicate analysis of NIST mAb standard on LC. 37 peaks with >0.03% relative area were found. Peaks >0.5% show RSD of <5%; Peaks <0.5% show RSD of <10%
Thermo Scientific Accucore 150 Amide HILIC 色谱柱基于 Core Enhanced Technology，可提供快速、高分辨率的生物分子分离——无需亚 2 µm 颗粒所需的高背压。使用 GlycanAssure HyPerformance 制备的 NIST mAb 标准品分析以及 Vanquish Flex UHPLC 分析产生 37 个具有高分辨率和高重现性的峰。
使用 Thermo Scientific Chromeleon 色谱分析数据系统 (CDS) 软件简化实验室工作流程。此软件可以为符合 GxP 生物制药生产和 QA/QC 环境提供卓越的仪器控制、自动化和数据处理性能。从方法创建到最终报告，在企业环境下进行您的常规 UHPLC-FLD 聚糖分析。
GlycanAssure 软件是易用的聚糖数据采集和分析软件，并包括安全性、审计和电子签名 (SAE) 功能。它通过直观式仪表盘设计、高度清晰的常用操作按钮、易于阅读的图形显示屏来监控耗材状态、简化孔板设置，提供便捷的维护计划日历功能，实现用户友好的导航新突破。
GlycanAssure 数据分析软件可以快速查看已分析和未分析的聚糖样品，并对不同的分析方法进行快速比较。其具有内置质控初级分析功能，因此您可以在生成数据时判定数据质量，无需将输出文件传输到其他软件。
GlycanAssure 软件具有完整的安全、审计和电子签名功能，符合 21 CFR part 11 要求。
Applied Biosystems GlycanAssure HyPerformance 系统采用基于磁珠的样品制备和荧光染料标记，可以在完全去糖基化的同时保留唾液酸。标记的聚糖可用 Vanquish Horizon UHPLC液相色谱分析或 Applied Biosystems 3500XL 蛋白质量分析仪上的高通量毛细管电泳分析。
Applied Biosystems GlycanAssure HyPerformance AutoXpress 试剂盒将基于磁珠的技术和试剂与 Automate Express 仪器相结合，提供即用型全自动样品制备解决方案。
Applied Biosystems GlycanAssure HyPerformance 可灵活开展样品制备和聚糖分析，同时通过完全去糖基化、保留唾液酸确保准确一致的数据。
GlycanAssure 软件是易用的聚糖数据采集和分析软件，并包括安全性、审计和电子签名 (SAE) 功能。它通过直观式仪表盘设计、高度清晰的常用操作按钮、易于阅读的图形显示屏来监控耗材状态、简化孔板设置，提供便捷的维护计划日历功能，实现用户友好的导航新突破。
GlycanAssure 数据分析软件可以快速查看已分析和未分析的聚糖样品，并对不同的分析方法进行快速比较。其具有内置质控初级分析功能，因此您可以在生成数据时判定数据质量，无需将输出文件传输到其他软件。
GlycanAssure 软件具有完整的安全、审计和电子签名功能，符合 21 CFR part 11 要求。
Applied Biosystems GlycanAssure HyPerformance 系统采用基于磁珠的样品制备和荧光染料标记，可以在完全去糖基化的同时保留唾液酸。标记的聚糖可用 Vanquish Horizon UHPLC液相色谱分析或 Applied Biosystems 3500XL 蛋白质量分析仪上的高通量毛细管电泳分析。
Applied Biosystems GlycanAssure HyPerformance AutoXpress 试剂盒将基于磁珠的技术和试剂与 Automate Express 仪器相结合，提供即用型全自动样品制备解决方案。
Applied Biosystems GlycanAssure HyPerformance 可灵活开展样品制备和聚糖分析，同时通过完全去糖基化、保留唾液酸确保准确一致的数据。
热点网络讲座
一种可缩短时间和工作量的聚糖分析方法
Johnie Young，
分子生物学研发科学家，
Thermo Fisher Scientific
GlycanAssure™ HyPerformance 样品制备试剂盒采用基于磁珠的技术，可快速、完整地释放 N-聚糖并保留唾液酸。基于磁珠的样品制备方法所得的样品可实现更佳的毛细管电泳 (CE) 或液相色谱 (LC) 分析平台分析结果。该试剂盒还为聚糖变性和去糖基化、释放聚糖的标记以及过量游离染料的清除提供了简单的工作流程。
发现一种简单、稳定且自动化的 3 步工作流程：在 UHPLC 和多毛细管 CE 上进行 N-聚糖分析
Anahita Eckard 博士
制药分析研究员，生物生产部
Thermo Fisher Scientific
随着新开发的生物治疗药物越来越多、生物仿制药市场快速增长——快速、高通量和准确的 N-聚糖分析变得至关重要。Thermo Fisher Scientific 开发了一种快速的 N-连接聚糖释放、标记和纯化方法，可以根据通量需求，选择手动和无需手动的自动化方式进行样品制备。该工作流程采用新型的快速去糖基化试剂进行完全去糖基化，并采用磁珠进行过量染料去除。
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