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RNA FISH(RNA 荧光原位杂交)是一种强大的技术,可对固定细胞中的 RNA 和蛋白靶标进行可视化和定位。使用 Invitrogen ViewRNA 和 PrimeFlow RNA 检测试剂盒的超灵敏 RNA FISH 结合了专有的探针集设计和分支 DNA(bDNA)信号放大技术,该技术直接从样品源测量 RNA ,无需 RNA 纯化或酶促操作。使用 bDNA 技术的 RNA FISH 具有更高的特异性、更低的背景和更高的信噪比。
传统 FISH 技术使用经一至五个荧光基团标记的大寡核苷酸序列,由于非特异性结合和信号放大不足而受到高背景和低灵敏度的限制。采用 bDNA 技术,一个约 20 个短寡核苷酸对的靶标特异性探针组能够与目标 RNA 序列中的特定区域杂交。后续信号放大步骤要求每个寡核苷酸对在相邻位置与靶标 RNA 结合,为靶标提供特异性,并提供其他寡核苷酸杂交的对接位点。其他杂交步骤最终会产生荧光标记的 " 杂交树 " ,该树可通过成像或流式细胞术提供单个 RNA 分子检测。目前有四种类型的荧光探针组可用于 ViewRNA 细胞或 PrimeFlow RNA 检测,并使用具有不同发射光谱的多种 Alexa Fluor 染料。当在单一样本中检测到超过一种 RNA 靶标时,每种探针集必须为独特类型,以便将其信号与其他信号进行区分。仅有两种类型的探针组可用于 ViewRNA ISH 组织测定,这两种探针组采用 Fast 红色或 Fast 蓝色底物经荧光或化学发光法进行检测。
采用 bDNA 技术进行的信号放大通过一系列顺序杂交步骤完成,从而形成树状结构。前置放大器分子与各自的结合寡核苷酸探针成对杂交,形成该树状结构的 " 树干 "。多个放大器分子与各自的前置放大器杂交以形成“分支”。最后,多个标记探针与放大器杂交,形成树状结构的“叶片”。完全组合的信号放大树含 400 个标记探针结合位点。如果 20 寡核苷酸对探针组中的所有靶标特异性寡核苷酸与靶 RNA 转录物结合,可实现 8000 倍放大。
bDNA 的形成。描述 bDNA 技术如何实现信号放大的示意图。
ViewRNA ISH 细胞检测 | ViewRNA Cell Plus 检测 | ViewRNA 组织检测 | ViewRNA 组织荧光检测 | PrimeFlow RNA检测试剂盒 | ||
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mRNA ISH | 高内涵 ISH | |||||
细胞样品 | 培养细胞(贴壁或悬浮) | 培养细胞(贴壁或悬浮) | 培养细胞(贴壁或悬浮) | FFPE 组织切片 | FFPE 组织切片 冷冻保存的组织切片 细胞培养细胞(贴壁) | 单细胞悬液(原代或培养物) |
多色标记 | 可同时检测多达 4 个 RNA 靶标 | 可同时检测多达 4 个 RNA 靶标 | 可同时检测多达 4 个 RNA 靶标(包括 miRNA) 和一个或多个蛋白靶标或上述任意组合 | 可同时检测多达 2 个 RNA 靶标(包括 miRNA) | 可同时检测多达 4 个 RNA 靶标,包括 microRNA | 可同时检测多达 4 个 RNA 靶标(包括 miRNA) |
抗体兼容性 | 否 | 否 | 是 | 否 | 否 | 是 |
检测信号 | 荧光
| 荧光
| 荧光
| 荧光或比色分析
| 荧光 Invitrogen Alexa Fluor 488,546,594,647 和 750 染料 | 荧光
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仪器 | 荧光显微镜或高内涵成像系统 | 高容量成像系统 | 荧光显微镜或高内涵成像系统 | 荧光显微镜或宽场显微镜 | 荧光显微镜、高内涵成像系统或玻片扫描仪 | 流式细胞仪 |
检测规格 | 盖玻片安放在载玻片、腔式载玻片或 96 孔板上 | 96孔或384孔板 | 盖玻片安放在载玻片、腔式载玻片或 96 孔板上 | 安放于显微镜载玻片上的组织切片 | 安放于显微镜载玻片上的组织切片
| 管或 96 孔 V 形底板 |
需要以读盘器形式检测 RNA ?
请参见 用于 RNA 检测的 QuantiGene SinglePlex 检测
仅供科研使用,不可用于诊断目的。